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副猪嗜血杆菌基因表达文库的构建和新基因的挖掘

罗如松  
【摘要】: 副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)是一种无运动性,多形态革兰氏阴性杆状细菌,属于巴斯德氏菌科。该菌是革兰瑟氏病的致病因子,以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征;由于高发病率和死亡率,该病给全球的养猪业造成了巨大的经济损失。目前,人们对副猪嗜血杆菌的研究尚处于起始阶段,特别是分子水平的研究刚起步,公开报道的基因数不到20个。本研究旨在建立副猪嗜血杆菌血清5型地方株的基因组表达文库,为发掘副猪嗜血杆菌血清5型地方株新的功能基因奠定基础。 选择我国流行优势菌株副猪嗜血杆菌血清5型地方株为研究对象,提取细菌基因组DNA,用限制性内切酶Sau3AⅠ对基因组DNA进行部分酶切,回收大小为1~5Kb的DNA片段,将其连接入原核表达载体pET-28a-c,最后转化宿主菌,结果成功地构建了基因表达文库,为后续的基因筛选工作奠定基础;另外,本研究选择嗜血杆菌属的流感嗜血杆菌为参考对象进行引物的设计,以副猪嗜血杆菌血清5型地方菌株的基因组DNA为模板,进行PCR扩增反应,结果表明成功地获得两个新基因:23S rRNA基因(存在于核糖体大亚基中的保守性基因)和腺苷酸环化酶基因(负责将腺嘌呤核苷三磷酸转变为环腺苷酸),并进一步做了不同物种之间的分子系统发育分析,构建了基于23S rRNA基因的邻接法系统发育树,阐明了副猪嗜血杆菌与其它菌种的分子进化关系。


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