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尼可霉素提取工艺,HPLC定量分析方法及剂型初步研究

汪志鑫  
【摘要】: 尼可霉素是一种生物农药,属于核苷肽类抗生素,通过抑制真菌细胞壁骨架成分之一几丁质的合成产生药效。尼可霉素目前通过微生物发酵手段生产,发酵工艺中对发酵液的提取有离子交换法和减压浓缩法,本文通过对后一种工艺中浓缩温度及发酵液pH两种因素的优化,使得率由32—35%提高到57-61%。尼可霉素的定量检测一般采用微生物检定法,效率和精密度均较低,而如果采用液相色谱法检测,尼可霉素的两种组分X,Z在常规反相色谱条件下又不易分离。本文采用离子对反相色谱,通过对流动相中有机系水系的比例,缓冲液pH,缓冲液浓度,离子对试剂的浓度等色谱条件的摸索,确定色谱条件为:流动相比例水/甲醇=94/6,缓冲液pH3.6,缓冲液浓度10 mM,离子对试剂浓度10 mM,流速1ml/min。在此条件下实现了X,Z组分色谱峰基线分离,建立了尼可霉素的离子对反相色谱的检测方法,加快了分析时间并提高检测精密度。回归方程为:Y=16627X+291874,r=0.9945,其中Y为峰面积,X为浓度(μg/mL)。该法在31.2—250ug/ml浓度范围内线性关系良好。精密度RSD=1.97%,平均回收率为97%,样品的日间稳定性良好,RSD=0.542%。本文还对尼可霉素的三种剂型的稳定性进行了研究,发现水剂的稳定性差,无法商品化。研究了可溶性粉剂和可溶性粒剂的载体及助剂对其稳定性的影响,筛选出合适的载体及助剂。可溶性粉剂的初步配方为(%):原药30,载体J30,表面活性剂S2 8.49,GS1 8.49,光保护剂M 10,抗氧化剂(抗坏血酸)0.02,干燥剂5,防腐剂(NaCl)8,可溶性粒剂的初步配方为(%):原药40,载体C2 30,表面活性剂GS3 30。


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