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吴茱萸生物碱的提取、纯化、结构及抗氧化性能的研究

王君伟  
【摘要】: 吴茱萸(Evodia Rutaecarpa)为芸香科(Rutaceae)吴茱萸属植物。其药用部分为成熟的果实,是一种常用中药,具有散寒止痛,疏肝下气,温中燥湿之功效。本论文以吴茱萸为原料,对其中主要的活性成分生物碱进行提取、分离、纯化、结构初步鉴定及功能方面研究。 1吴茱萸生物碱提取工艺条件的优化 从乙醇、甲醇、乙酸乙酯3种溶剂中,选取乙醇为最佳提取溶剂。从冷渍法、超声提取、热回流、索氏提取4种常规提取吴茱萸生物碱方法中,确定了效率最高的索氏提取为最佳提取方法。通过对提取次数的得率比较,确定只需提取1次即可。 以原料目数、乙醇浓度、溶剂倍数和提取时间为影响因素,以吴茱萸碱和次碱得率为指标,通过响应面分析试验结果可知,各因素中,乙醇浓度对得率的影响最大,依次是原料目数、提取时间和溶剂倍数。确定吴茱萸生物碱最佳提取条件为原料目数为40、提取时间为3.0h、溶剂倍数为31、乙醇浓度为72%,吴茱萸碱得率为8.90mg/g。 2吴茱萸生物碱的分离纯化 通过4种大孔吸附树脂静态吸附实验得出,HPD450为最佳纯化树脂,乙醇为最佳的解吸溶剂。通过HPD450大孔吸附树脂动态洗脱单因素实验,得出动态洗脱的最佳条件:每克树脂上样2.4mg,1mL/min的吸附速率,pH值为9时,5BV的70%乙醇洗脱,1mL/min的解吸速率,初步纯化效果较好。还从3种阳离子交换树脂中选取D113进行吸附研究,动态洗脱效果比大孔吸附树脂稍好。再用葡聚糖凝胶LH-20进行分离,得到了吴茱萸碱和次碱单体,与一个混合组分。再通过结晶和薄层层析,对此混合组分进行了进一步分析。 3吴茱萸生物碱的结构分析 采用紫外光谱和红外光谱对吴茱萸生物碱进行分析,找到了最大吸收峰和特征基团。用高效液相色谱对吴茱萸生物碱进行检测,得到了适合混标和单标的流动相和仪器条件,吴茱萸生物碱纯化产物中吴茱萸碱与次碱的含量分别为95.00mg/g和86.00mg/g。对纯化所得样品用液质联用进行分析,初步断定是5种喹诺酮类生物碱,其中4种已经有文献报道,另一种还需核磁共振等进一步检验。 4吴茱萸生物碱的抗氧化活性 化学模拟体系实验表明,吴茱萸生物碱的还原能力比抗坏血酸低,在0.005mg/mL~0.2mg/mL,还原能力与浓度正相关。等浓度下吴茱萸生物碱清除羟基自由基的能力比抗坏血酸高,在0.2mg/mL时清除率达到46%。吴茱萸生物碱清除超氧阴离子和清除二苯代苦味酰基自由基的能力都比较强,在0.05mg/mL时清除率达到80%左右,大于0.05mg/mL时清除率基本不变。等浓度下吴茱萸生物碱清除超氧阴离子和清除二苯代苦味酰基自由基的活性比抗坏血酸略高。


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