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甘蓝型油菜隐性细胞核雄性不育基因的分子标记

俎峰  
【摘要】: 甘蓝型油菜隐性细胞核雄性不育系7-7365A的育性受两对隐性重叠不育基因(ms3ms3、ms4ms4)和一对隐性上位基因(rfrf)互作控制,两对不育基因隐性纯合时可导致雄性不育,而上位基因隐性纯合时则可抑制不育基因的表达,使育性恢复正常。该材料具有败育彻底,不育性稳定,无不良胞质效应,恢复源广泛,任何一个品系均能成为其恢复系,配组相当自由,极易获得强优势组合等特点。同时用该不育系配制杂交种可以免除人工拔除50%不育株的麻烦,因此在油菜育种中的应用将会越来越广泛。 本研究以7-7365A衍生材料7-736512AB两型系为材料,围绕雄性不育育性恢复基因(BnMs4)及不育基因(Bnms4)开展了以下工作: 1)利用不育材料7-736512A(Bnms3ms3ms4ms4RfRf)与可育材料7-736512B(Bnms3ms3Ms4ms4RfRf)构建Bulk池筛选768对AFLP引物,获得12个与BnMs4连锁的AFLP标记,将标记差异片段回收、克隆、测序并设计引物转化SCAR标记。获得2个SCAR标记(SM25,SM129),位于目标基因的同侧,遗传距离分为0.6cM、0.75cM。 2)对获得的12个与BnMs4连锁的AFLP标记中8个标记通过PCR Walking技术进行侧翼序列分离,共计获得12kb的标记侧翼序列信息,依据得到的侧翼序列,设计引物转化SCAR标记。获得2个SCAR标记(SM98,SM113),同上述两个SCAR标记同侧,遗传距离分为0.85cM、1.2cM。 3)利用不育材料7-736512A(Bnms3ms3ms4ms4RfRf)与纯合可育材料7-736512B(Bnms3ms3Ms4Ms4RfRf)构建Bulk池筛选512对AFLP引物,获得8个与Bnms4连锁的AFLP标记,将标记差异片段回收、克隆、测序设计引物转SCAR。结果获得2个SCAR标记(Sm163,Sm312)。 4)将获得的SCAR标记用于育种实践,发现SM113与Sm163在多种类型的材料中有多态性,能够运用于新的隐性核不育系的转育和恢复系、临保系的筛选。


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