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单克隆抗体检测炭疽芽孢

王殿冰  
【摘要】: 炭疽芽孢杆菌是一种杆状革兰氏阳性细菌,且能引起人畜共患的炭疽病。在营养匮乏时,炭疽芽孢杆菌可产生芽孢,以抵御环境中的不利因素。由于炭疽芽孢具有极强的生命力,一直被列入生物武器中头号战斗剂。因此,如何快速,准确的检测炭疽芽孢成为当今人类必须要解决的难题。 本研究中,通过灭活的炭疽芽孢作为免疫原,筛到了三株高亲和力且特异性很好的单克隆抗体(8G3,10C6,12F6)。这三株抗体不仅可以识别炭疽芽孢表面,还可直接检测完整的炭疽芽孢杆菌,并且同苏云金、蜡样等芽孢杆菌属的其它成员无交叉反应。其中,单克隆抗体8G3与炭疽芽孢亲和力最高,而12F6则是用于炭疽芽孢杆菌检测的最佳选择。经鉴定,三株抗体的靶抗原均是EA1蛋白。 EA1,作为炭疽芽孢杆菌S层的主要抗原之一,已经被广泛认知。然而,研究者们对“EA1是否也是真正的芽孢蛋白”这一问题有着不一样的看法。我们的试验结果表明,在纯化、洗涤芽孢的过程中,该蛋白持续且大量的存在于炭疽芽孢表面。即使经过严谨洗涤的炭疽芽孢,依然可以被我们的单克隆抗体识别。因此,不管上述问题的答案是肯定还是否定,EA1都可用作炭疽芽孢检测的靶标。 除此之外,我们首次将表面等离子共振(SPR)传感器应用于炭疽芽孢的检测,并且建立了直接,快速,灵敏且无标记的炭疽芽孢检测方法。该方法基于BIAcore3000传感器,特异性单克隆抗体8G3及消减抑制试验,可在40 min之内,检测出浓度低至为10~4 CFU/ml的炭疽芽孢,并且很容易将其与苏云金,蜡样等其它近缘细菌的芽孢分开。因此,该方法可作为实验室检测炭疽芽孢的另一种选择,一旦便携式SPR可以获得,即可应用于炭疽芽孢的现场检测。


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