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同时检测多种环境激素污染物的液相免疫芯片技术研究

冯屹  
【摘要】: 近些年来,研究发现一些存在于环境中的化学物质具有类似内分泌激素的作用,可以导致生物体内分泌系统紊乱,因此将这类物质统称为环境激素(Environmental Endocrine, EE)。EE在环境中分布广泛且多为脂溶性的有机小分子,化学性质特别稳定,在体内和体外都不易分解,通过食物链进入生物体内后,可蓄积于脂肪组织内,从而对人和其他生物体的生殖与发育系统、免疫系统及神经系统等造成伤害。目前,EE已威胁到人和动物的生殖健康甚至物种的繁衍。 为了保护生态环境,预防环境激素污染物(Environmental Endocrine Pollutants, EEP)通过食物链进入人体,发展灵敏、快速及成本低的分析检测技术是非常必要的。目前,EEP主要使用GC-MS、HPLC及LC-MS来进行分析与确证,但是存在样品前处理过程复杂、操作繁琐、仪器昂贵、检测成本偏高等缺点,不能很好地满足日常分析及现场检测的需求。而免疫学方法由于具有灵敏度高、特异性强、操作方便和成本低等优点,已被应用于EEP的日常分析检测,特别适用于对大量样品进行分析筛选。然而目前多数免疫分析方法通常一次实验仅能分析一种EEP,而样品中往往是同时存在多种EEP。因此发展效率更高的能对样品中的多种EEP同时分析的免疫学方法是目前拟解决的关键问题。 本研究以双酚A(Bisphenol A,BPA)、2,4-滴(2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid,2,4-D)及毒死蜱(Chlorpyrifos, CHI)三种典型的EEP为分析对象,在构建BPA、2,4-D与CHI完全抗原与制备抗BPA抗体的基础上,采用Luminex技术建立了能同时分析上述三种EEP的LIA,并与酶联免疫吸附检测方法(ELISA)和HPLC进行了比较分析。具体的研究内容如下。 1.完全抗原的制备 本研究采用活性酯法分别制备BPA、2,4-D及CHI的完全抗原偶联物。经质谱分析表明BVA-BSA、2,4-D-BSA及CHI-BSA的摩尔偶联比分别为15:1、22:1和11:1。 另外首次采用Mannich法将BPA与阳离子化牛血清白蛋白(cBSA)偶联,构建了完全抗原BPA-cBSA,产物经质谱分析其摩尔偶联比为14:1。 2.BPA抗体的制备 以BVA-BSA和BPA-cBSA分别免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,完全抗原均能有效地产生抗BPA的抗体,BPA-cBSA组抗血清效价高于BVA-BSA组。上述结果表明,小鼠对BPA-cBSA的免疫应答水平显著高于BVA-BSA。 3.BPA、2,4-D及CHI的ELISA研究 3.1间接竞争ELISA 以上述自制的抗BPA抗体与购买到的抗2,4-D及CHI抗体为材料,分别建立了检测BPA、2,4-D与CHI的间接竞争ELISA,绘制它们的ELISA标准曲线,其线性范围分别为40~1289、34~1914与38-234 ng/mL,半抑制率(IC50)分别为177、366及108ng/mL,最低检出限(LOD)分别为16、3与8 ng/mL。 将不同浓度的BPA(400、100和25 ng/mL)、2,4-D(800、200和50 ng/mL)及CHI(200、100和50 ng/mL)分别添加于空白的自来水和河水中,BPA、2,4-D与CHI的平均加标回收率分别为68%~142%、55%~135%及90%~108%,平均变异系数分别为6%~15%、6%~14%及3%~12%。 3.2 BPA的半抗原直接包被ELISA研究 在建立了检测BPA的间接竞争ELISA的基础上,建立了检测BPA的半抗原直接偶联ELISA (dhc-ELISA),绘制其dhc-ELISA标准曲线,其线性范围为2-157ng/mL, IC50及LOD约为23.5及0.3 ng/mL。 将不同浓度的BPA(250、50和10 ng/mL)分别添加于空白的自来水和河水中,以建立的dhc-ELISA进行检测,结果显示平均回收率与平均变异系数分别为60%-132%及6%-13%。 4.BPA、2,4-D及CHI的液相芯片技术研究 经条件优化后,分别绘制了BPA、2,4-D和CHI的间接竞争Luminex标准曲线,检测区间分别为0.8~246.1、5.4~391.1及14.2-364.9 ng/mL,IC50值分别为30.8、64.0及98.3 ng/mL,LOD值分别约为0.03、0.35及0.16 ng/mL。 在建立了检测三种靶标物的Luminex方法的基础上,为了全面考察液相芯片多通道检测实际样品的能力,添加BPA(10、50及150 ng/mL)、2,4-D(20、100及300 ng/mL)及CHI(30、150及450 ng/mL)标准品于空白的河水或自来水中分别配制成18种不同组份样品。结果表明,当样品中仅含有一种靶标物时,BPA、2,4-D及CHI在水样中的平均加标回收率分别为41%~132%、64%~147%及52%~109%,平均变异系数分别为0.8%~8.7%、0.3%~9.6%及1.7%~8.8%。当样品中两种靶标物同时存在时,BPA、2,4-D及CHI在水样中的平均加标回收率分别为52%~123%、51%~121%及64%~97%,平均变异系数分别为0.9%-9.9%、0.6%-6.0%及0.8%-5.8%。当样品中三种靶标物并存时,BPA、2,4-D及CHI在水样中的平均加标回收率分别为43%~66%、62%~112%及51%~68%,平均变异系数分别为3.2%-5.5%、1.1%~9.3%及2.2%~7.1%。上述结果表明Luminex法能够较好对样品的多靶标物进行同时分析。


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1 金仁耀;吴建祥;朱国念;陈则利;寿林飞;;抗克百威单克隆抗体的研制[J];农业环境科学学报;2006年05期
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6 汪丰云;环境激素化学[J];化学世界;2000年05期
7 ;环境激素威胁人体健康[J];黑龙江环境通报;2000年04期
8 ;环境激素威胁人体健康[J];陕西环境;2001年02期
9 刘苹;环境激素与人类健康[J];云南环境科学;2001年S1期
10 王勇,万涛,曾黎明;环境激素与FRP废弃物处理[J];广东建材;2001年05期
11 张美英;环境激素与生殖健康[J];西北人口;2002年02期
12 邵晓龙,李季;免疫分析技术在环境激素检测中的应用[J];农业环境与发展;2004年02期
13 倪合一;环境激素威胁人类繁衍[J];中国保健营养;1999年03期
14 江田汉,杨晓明,赖玉平;环境激素问题浅析[J];环境保护;2000年05期
15 江田汉,杨晓明,赖玉平;环境激素问题浅析[J];中国环境管理;2001年01期
16 周少奇,林云琴;环境激素污染研究进展[J];环境污染与防治;2004年01期
17 王云采 ,贲越;环境激素,人类生殖健康的杀手[J];生活与健康;2004年04期
18 贲亚琍;朱德锐;胡芹芹;李娜;熊丽;刘德立;;呋喃丹多克隆抗体的制备与初步应用[J];环境科学研究;2008年03期
19 范士忠;;警惕“环境激素”危害健康[J];民防苑;2008年02期
20 刘建华;;抵御环境激素的侵害[J];环境;1999年07期
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1 邢春莲;徐阳阳;赵蕊;杨一;崔立莉;曹健荣;;血筛产品(ELISA)检测能力的评价[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
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6 王丽;朱立苇;徐霄勤;杨雪梅;王拥军;吕杭军;;4项目复合ELISA室内质控品制备方法的建立和评估[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集(摘要篇)[C];2010年
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9 肖一红;吕军华;聂力;马晓春;周恩民;;高致病性与传统型PRRSV鉴别诊断间接ELISA方法的建立及初步应用[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
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1 本报记者 何源;走近法国软件产业[N];电脑报;2003年
2 李剑;环境激素防不胜防[N];中国妇女报;2003年
3 李树泉;环境激素对人类的危害[N];河北日报;2003年
4 杨俊杰 陈军 韩波;环境激素成为生物杀手[N];健康报;2004年
5 李剑;警惕环境激素的危害[N];人民日报海外版;2003年
6 李剑;环境激素的危害防不胜防[N];市场报;2002年
7 滢子;解读环境激素[N];上海科技报;2002年
8 中国疾病预防控制中心环境所 蔡诗文 刘迎春;环境激素对健康威胁究竟有多大[N];健康报;2009年
9 本报记者 韩璐;环境激素:健康危害知多少[N];健康报;2009年
10 实习生 陈高翔 本报记者 李禾;缺乏界定标准 “环境激素”肆虐[N];科技日报;2010年
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