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辛开苦降法对NASH大鼠肝组织PPARα及L-FABPmRNA表达影响的实验研究

杨新芳  
【摘要】:目的 以温病学湿热证理论为指导,从脾胃立论,以王氏连朴饮为基础方加味,观察辛开苦降法对非酒精性脂肪肝肝炎(NASH)大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)及肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)基因(L-FABPmRNA)表达的影响,探讨辛开苦降法调节实验性NASH大鼠脂质代谢相关因子,减轻脂类在肝脏的积聚,缓解氧化应激、脂质过氧化,保护肝细胞,改善肝功能的作用。从脂质代谢调节因子PPARα和L-FABP的相互关系研究NASH的病理机制;研究辛开苦降法对NASH的干预作用及其机理。从细胞和分子水平为NASH中医药防治理论提供理论依据。 方法 清洁级SD大鼠40只,雌雄各半,体重190-210克左右,随机分为4组,分别为:A组:正常对照组B组:空白模型组C组:辛开苦降方防治组D组:西药对照组(东宝肝泰防治组)每组10只大鼠,常规饲养3天后,B、C、D三组予以基础饲料+高脂饲料(10%猪油、2%胆固醇)进行NASH造模,8周后各组在高脂饲料喂养同时,C组辛开苦降方1ml/100g/d灌胃,每日一次,D组予以东宝肝泰混悬液1ml(0.09g),每日一次,AB组予以生理盐水1ml/100g/d灌胃,每日一次。各模型组给药4周后(即实验12周)以2%戊巴比妥钠溶液麻醉处死所有动物,迅速按常规分离血清及留取肝组织。检测血清指标:谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)等。取肝右叶,4℃下制成肝匀浆,按试剂盒操作说明分别测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、游离脂肪酸(FFA)、谷胱甘肽转移酶(GSH-ST)含量,结果以每克肝组织的含量表示。肝组织病理观察:将肝组织用4℃生理盐水冲洗,在肝脏最大叶距边缘5mm处取小块肝组织,中性福尔马林固定,石蜡包埋,切片,HE染色,光镜下观察,评估脂肪变性和炎症活动程度。另小块肝组织放-80℃冰箱冻存以备作western blot检测L-FABP。原位杂交技术检测肝组织PPARα、L-FABP mRNA的表达,显微镜下观察显色结果及摄影记录。用医学图象分析系统行图象分析,得出积分光密度。 结果 1.各组大鼠肝功能和血脂比较:D组(东宝肝泰组)相比B组能够降低NASH大鼠的TG,TCH水平(p0.05);C组(辛开苦降方组)大鼠血清TG,TCH,ALT,AST水平较各模型组显著降低(P0.01),作用优于D组(P0.05) 2.NASH模型组大鼠肝组织出现中重度脂肪变、不同程度的炎细胞浸润及坏死,肝组织MDA含量较正常大鼠显著增高,肝匀浆SOD的活性明显降低,模型组较对照组肝组织PPARαmRNA下降(p0.05)和L-FABPmRNA表达显著增强(p0.01)。 3.肝组织PPARαmRNA基因的表达于MDA含量呈明显正相关,与SOD和活性则呈明显负相关。L-FABPmRNA则相反。 4.各组大鼠肝组织炎症活动程度、肝匀浆MDA含量、肝组织基因PPARαmRNA和蛋白表达均较模型组大鼠显著降低,肝匀浆SOD、的活性则较模型组大鼠明显增高。 结论 1.辛开苦降方可以有效降低NASH模型大鼠的肝湿重、肝指数、血清ALT、AST、TC、TG及肝组织FFA水平,MDA含量(P0.01或P0.05),能提高NASH大鼠肝组织SOD活性(P0.01),改善病理组织学变化,具有显著的抗脂肪氧化、抗炎作用。 2.肝组织PPARα和L-FABP基因表达水平与NASH的形成和发展密切相关,辛开苦降方对模型大鼠肝组织PPARα mRNA表达明显增强(P0.05),对L-FABP mRNA和蛋白表达减弱(P0.01),二者之间呈负相关关系; 3.辛开苦降方能够激活PPARα和L-FABP mRNA表达,纠正肝脏脂质代谢紊乱,阻止脂质过氧化反应,这可能是其防治NASH的重要分子机制; 4.辛开苦降方增强大鼠PPARα和L-FABP基因的表达的同时亦不会使脂质过氧化作用对肝脏过多的损伤,故而最后能够保肝降酶、减少血脂、降低和防止脂肪肝形成的用途; 5.从病理学改变、生化指标以及PPARα和L-FABP基因所表达结果而看,辛开苦降方防治NASH的效果均能够比东宝肝泰对照组有优势。


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