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独一味总环烯醚萜苷镇痛作用及其机理的研究

严何  
【摘要】:目的: 1、建立和比较实验性神经病理性疼痛大鼠的造模方法。 2、从独一味药材中富集提取总环烯醚萜苷,研究其对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用,初步探讨其镇痛作用机制,为指导独一味的临床应用提供基础。 方法: 1、采用大孔吸附树脂结合聚酰胺柱色谱的方法,从独一味药材中富集分离总环烯醚萜苷,并运用高效液相色谱法(HPLC)对其进行含量测定。 2、运用坐骨神经分支选择性损伤性(SNI)模型建立的方法,建立大鼠神经病理性疼痛模型。 3、独一味总环烯醚萜苷通过灌胃方式给药后,采用机械缩足反应阈值的实验评价其体内镇痛作用。 4、取大鼠腰椎膨大部位(L4~L6),以N0、总NOS和细胞因子TNF-α、 IL-1β、IL-10为检测指标,按照试剂盒的规定,运用生化分析方法将纯化得的有效部位进行镇痛作用的研究,并将取得的腰椎膨大部位以p-CREB为抗体采用免疫组织化学法进行分析,为进一步应用和开发独一味功能性药品、保健品提供理论依据。 结果: 1、独一味总环烯醚萜苷的分析结果表明,独一味经过分离提取过程后的总环烯醚萜苷和8-0-乙酰山栀子苷甲酯具有相似的紫外吸收,8-0-乙酰山栀子苷甲酯的最大吸收波长为235nm,经过HPLC含量测定,测得总环烯醚萜苷中环烯醚萜苷的含量约为70.4%。通过高效液相色谱分析显示,独一味中总环烯醚萜苷的主要成分为8-0-乙酰山栀子苷甲酯、山栀子苷甲酯等。 2、大鼠实验证明,SNI模型建立的方法成功造模,形成慢性神经性疼痛模型。并且由大鼠体内试验结果显示,独一味能使神经性疼痛大鼠精神好转,活动增多,机械痛阈值升高,改善脚爪外翻的症状。 3、大鼠实验结果表明,独一味高、中、低(250mg/kg,500mg/kg,1000mg/kg)三个剂量组均能显著降低神经性疼痛大鼠脊髓中的NO、总NOS值,以及降低细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10的值。 4、以p-CREB为抗体的免疫组化,与正常组,假手术组相比,模型组、独一味剂量组的阳性光密度值增高,模型组与独一味高中低剂量组比较,阳性光密度值也有所增高,由此可证明独一味可明显降低p-CREB的阳性光密度值。 结论: 1、聚酰胺柱法结合大孔吸附树脂可以更好地富集分离独一味总环烯醚萜苷。 2、在体内试验中,独一味总环烯醚萜苷可以表现出良好的对神经性疼痛模型起到镇痛作用。 3、独一味能显著降低NO和总NOS的表达,还能降低细胞因子TNF-α、 IL-1β的表达,增加IL-10的表达,由此可得独一味能显著降低神经性疼痛大鼠的星形胶质细胞和脊髓小胶质细胞量,减轻神经损伤,防止神经性疼痛的发生与发展,确定了,独一味镇痛活性的有效部位为总环烯醚萜苷,进一步阐明了独一味镇痛活性部位与镇痛活性之间的联系,为在临床上用中草药防止神经性疼痛开辟了一条新的思路,丰富了传统的中医理论依据,但其确切的有效成分及作用机制还需进一步研究。


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