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槲皮素对人食管癌Eca109细胞增殖与凋亡的影响及其机制探讨

廖应英  
【摘要】:目的:研究槲皮素对人食管癌Eca109细胞增殖与凋亡的影响,探讨槲皮素对人食管癌Eca109细胞凋亡影响的可能机制。方法:体外培养人食管癌Eca109细胞,取对数生长期的人食管癌Eca109细胞,经胰蛋白酶消化后,制成单细胞悬液,设定的5个不同浓度的槲皮素组(0μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L、320μmol/L),每组设5个平行孔。使用标准细胞计数板计数,调整细胞浓度为1×105/mL到96孔培养板上,每孔加100μl细胞悬液。分别作用24h、48h、72h后观察槲皮素对人食管癌Eca109细胞增殖的影响,采用MTT方法检测,用酶标仪测出每孔的OD值,根据OD值计算出人食管癌Eca109细胞增殖抑制率,以上实验重复三次,取平均值,分别计算出在不同时间、不同浓度的情况下槲皮素对人食管癌Eca109细胞增殖的抑制率。继续培养人食管癌Eca109细胞,观察细胞生长良好后,取对数生长期的细胞,给予胰蛋白酶消化后制成单细胞悬液,离心后PBS洗涤,再次离心后收集细胞。分别加入Binding Buffer、Annexin V-FITC、PI染色液后,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。采用流式细胞仪检测不同浓度槲皮素(0μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L、320μmol/L)作用24h后对人食管癌Eca109细胞凋亡的影响,得出凋亡率后取最佳浓度,用Western blot方法检测凋亡蛋白Bcl-2及Bax的含量及其表达情况。实验中所采集数据均采用SPSS19.0软件进行统计学分析,以P0.05为差异具有统计学意义。结果:5个不同浓度槲皮素(0μmol/L,40μmol/L,80μmol/L,160μmol/L,320μmol/L)作用于人食管癌Eca109细胞,分别作用24h、48h、72h后检测出的增殖抑制率IR(24h:0%,26.3%,36.0%,52.8%,64.4%;48h:0%,27.3%,37.8%,54.7%,63.8%;72h:0%,28.0%,39.7%,58.5%,66.9%),得出随着槲皮素浓度的增加、时间的延长,抑制作用逐渐增强(P0.05);不同浓度槲皮素作用人食管癌Eca109细胞的增殖抑制率明显高于对照组(P0.05)。5个不同浓度槲皮素(0μmol/L,40μmol/L,80μmol/L,160μmol/L,320μmol/L)对人食管癌Eca109细胞作用24小时后,通过流式细胞仪检测出凋亡率,凋亡抑制率随着浓度的增加分别为:2.09%、6.87%、14.7%、19.4%、22.3%,可以看出细胞凋亡抑制率随着浓度的增加而升高(P0.05),且明显高于对照组(P0.05)。在浓度320μmol/L和160μmol/L时,用Western blot方法检测出前者的凋亡蛋白Bcl-2与后者相比含量降低,表达下调,但Bax的含量则增加,表达上调,差异有统计学意义(P0.05)。结论:槲皮素能够明显的抑制人食管癌Eca109细胞的增殖,诱导人食管癌Eca109细胞的凋亡,呈时间和剂量依赖效应。其抑制凋亡的机制可能与Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调相关。


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