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白子菜降血糖活性物质研究

王业静  
【摘要】:白子菜[Gynura divaricata(L.)DC.]为菊科(Compositae)菊三七属多年生草本植物,又叫白子草、大肥牛、神仙草等,其用作地方用药收录在《福建省中药材标准》(2006年版)中,《福建省中药饮片炮制规范》(2011年版)中也对其鉴别特征和方法进行了详细的记载。白子菜民间常作为药食两用中草药,长期服用能明显降低血糖,故又名“救命草”,其根、茎、叶均可入药。现代药理学研究表明,白子菜具有明显的降血糖作用,但其降血糖的物质基础和作用机理尚不明确。本论文采用系统溶剂法将白子菜80%乙醇提取物分为石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水溶液四个不同极性部位。依据文献,采用以地塞米松诱导建立的3T3-L1细胞胰岛素抵抗模型作为白子菜降血糖活性体外筛选模型,在利用MTT法测定各部位对细胞的毒性的基础上,将各部位药物作用于该细胞模型,分别以GOP-POD法检测药物处理后细胞上清液中葡萄糖的消耗量、以ACS-POD法检测上清液中细胞外游离脂肪酸(FFA)的溢出量、以GPO-PAP法检测细胞内甘油三酯(TG)的含量,综合分析,确定白子菜降血糖有效部位。结果显示,正丁醇部位和水溶液部位均对3T3-L1细胞无明显毒性,高浓度组、24h时,可分别使产生胰岛素抵抗的3T3-L1细胞的葡萄糖消耗量增加24.5%和27.5%,可分别使细胞外游离脂肪酸溢出量减少9.9%和13.1%,同时可分别增加细胞内甘油三酯的含量31.8%和39.9%,故表明白子菜正丁醇部位和水溶液部位能通过调节糖代谢和脂代谢,改善3T3-L1细胞的胰岛素抵抗,为主要活性部位。为了深入探讨白子菜降血糖作用的物质基础,采用正相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶渗透色谱、MCI-GEL小孔吸附树脂以及制备HPLC等方法,对白子菜正丁醇部位的化学物质进行了分离纯化,从中共分离得到8个单体化合物,根据化合物的物理性质、NMR数据,并结合相关文献鉴定了其中4个化合物的结构,分别为β-谷甾醇-3-O-β-D-葡萄糖-6′-O-十七烷酸酯(β-sitosterol glucoside-6′-O-heptadecoicate,1),烟酸甲酯(methyl nicotinate,2),烟酸(nicotinic,3),豆甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(stigmasterol-3-O-β-D-glucopyranoside,6),其中化合物2烟酸甲酯(methyl nicotinate)为首次从该植物中分离得到。为了阐述白子菜降血糖作用的物质基础,本论文以产生胰岛素抵抗的3T3-L1细胞作为受试对象,对上述分离得到的单体化合物进行了活性筛选,结果显示化合物4和化合物5具有一定的降血糖活性,高浓度组、24h时,葡萄糖消耗量分别增加了6.2%和4.0%,游离脂肪酸溢出量分别降低了10.7%和9.5%,细胞内甘油三酯含量分别增加了12.0%和10.3%,其化学结构有待进一步解析。


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