含消癥丸大鼠血清对体外培养的人子宫肌瘤细胞增殖、凋亡作用的研究

【摘要】： 目的：运用血清药理学方法，研究消癥丸抑制人子宫平滑肌瘤(以下简称子宫肌瘤)细胞增殖和诱导凋亡的作用，从分子水平探讨消癥丸治疗子宫肌瘤的机理。 方法：将有活血破瘀、益气消癥作用的消癥丸制成水煎剂，按一定剂量给Wistar大鼠灌胃。按血清药理学实验方法，获取消癥丸含药血清，将含药血清稀释成5％、10％、20％三种浓度。取子宫肌瘤组织作原代培养，待细胞培养成功后，将三种浓度的血清分别作用于肌瘤细胞，用与其相对应的三种浓度的空白血清和完全培养液组对照。培养24h后，用MTT比色法、流式细胞仪检测子宫肌瘤细胞的增殖和凋亡的情况，用倒置相差显微镜、荧光显微镜等仪器观察各组子宫肌瘤细胞形态的变化。 结果： 1 含消癥丸大鼠血清对人子宫肌瘤细胞增殖的作用 倒置相差显微镜观察：消癥丸含药血清组肌瘤细胞的形态出现明显退行性改变：细胞收缩，由梭形变圆；细胞贴壁明显减少，逐渐脱落；细胞间出现明显空隙；背景培养液中细胞碎片、颗粒状物质增多。完全培养液组细胞密集，呈典型的平滑肌梭形形态；细胞界限清楚，胞膜完整；细胞贴壁生长，相邻细胞生长融合；背景中无或仅有少许碎片。空白血清组细胞生长状况和完全培养液组类似。 MTT法： (1)含药血清组细胞抑制率明显高于完全培养液组和空白血清(P＜0.05)；且20％含药血清组细胞抑制率为36.82％，明显高于其他两组合药血清组(P＜0.05)； (2)消癥丸含药血清浓度和细胞抑制率间存在曲线性关系(r=0.9360，回归方程为Y=0.5389+0.108901nx，p＜0.01)。在5％～20％浓度范围内，含药血清浓度越高，细胞抑制率越高。 (3)r~2=0.8760，故对细胞抑制作用的差异有87.60％是由血清浓度的差异引起的 2 含消癥丸大鼠血清对人子宫肌瘤细胞凋亡的影响 荧光显微镜：消癥丸含药血清组荧光小体(凋亡小体)数目较多；细胞核碎裂，呈荧光强弱不规则的荧光碎片和梅花形状的凋亡形态。20％含药血清组凋亡小体最多，完全培养液组几乎不见凋亡小体。 流式细胞仪： (1)消癥丸血清组凋亡细胞比例增明显高于完全培养液组和空白血清组(P＜0.05)；20％含药血清组凋亡细胞比例为26.88％，明显高于其他两个低浓度含药血清组(P＜0.05)。 (2)与完全培养液组和空白血清组相比，消癥丸血清组G_0／G_1期细胞比例明显增高(裂区设计方差分析，LSD test，P＜0.01)，S+G_2期细胞比例降低(裂区设计方差分析，Tamhane test，P＜0.01)；20％含细胞S+G_2期细胞比例低于5％含药血清组(Tamhane test，P＜0.01)，G_0／G_1期细胞比例高于5％含药血清组(LSD test，P＜0.05)，但与10％药血清组无统计学差异(均P＞0.05) (3)凋亡细胞比例有剂量依赖性，在5％～20％浓度范围内，凋亡细胞比例随含药血清浓度浓度升高而升高(p＜0.01)。 湘北中医李此 20()0救硕士研究生毕业抢文 结论: 1.含消疲丸大鼠血清能抑制人子官肌瘤细胞的增殖. 2.含消疲丸大鼠血清能诱导人子官肌瘤细胞的凋亡. 3.含消窟丸大鼠血清抑制人子宫肌瘤细胞增殖、诱导凋亡的作用与血清浓度相 关.在5%~20%浓度范围内，含药大鼠血清浓度越高，细胞的抑制率越高，凋 亡细胞比例越高。