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恐伤孕鼠对其仔鼠脑发育的影响及其机制研究

冯新玲  
【摘要】:目的 本实验采用“恐伤孕鼠”的方法复制肾精亏虚的模型,研究孕鼠肾虚对其仔鼠脑发育的影响机制。 方法 ①本实验采用3月龄SD(Sprague-Dawley)大鼠雌性30只,雄性15只,将其按2:1的比例合笼配对。受孕后的雌鼠用随机取数法分为正常组、模型组和补肾组,每组各10只。自怀孕第一天起,模型组和补肾组每日上、下午用猫恐吓孕鼠各2小时直至其分娩,在仔鼠出生当天和生后14天进行指标检测。②记录孕鼠产子数,评估其生育力。记录仔鼠开眼、出牙、张耳、被毛生长的时间;用电子天平称取仔鼠出生当天的体重及全脑湿重和生后14天的体重,从而判断仔鼠的生长发育状况。③光学显微镜和电子显微镜观察各组仔鼠出生当天和生后14天时大脑海马区的形态学改变。④化学发光法检测各组仔鼠生后14天时血清游离三碘甲腺原氨酸(FT_3)、游离四碘甲腺原氨酸(FT_4)及促甲状腺激素(TSH)的含量。⑤用琼脂糖凝胶电泳法检测各组仔鼠生后14天时海马区脑组织DNA降解片断,同时用免疫组化法观察细胞凋亡的相关指标Bcl-2/bax在海马区脑组织的表达。⑥用酶标仪检测各组仔鼠生后14天时海马区脑组织内乙酰胆碱转移酶(CHAT)和乙酰胆碱酯酶(Ache)的活力。⑦用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测脑源性神经营养因子(BDNF)在各组仔鼠生后14天时海马区脑组织的表达。 结果 ①孕鼠产子数、仔鼠的生长发育状况:模型组孕鼠的每胎生产数低于正常组和补肾组(P<0.01)。模型组仔鼠的生长发育落后于正常组和补肾组。补肾组与正常组相比无差异。②仔鼠大脑组织包括海马区的形态学改变:模型组仔鼠大脑组织包括海马区光镜下见神经细胞数量减少,细胞间质水肿,神经元树突分支减少。电镜下大多数神经细胞的细胞器结构有异常,部分细胞核固缩。正常组与补肾组仔鼠形态学相比无明显改变。③仔鼠生后14天时血清FT_3、FT_4、TSH的含量:模型组仔鼠血清FT_4的含量低于正常组(P<0.05),血清FT_3、TSH的含量与正常组相比无差异。补肾组仔鼠血清FT_3、FT_4、TSH的含量与正常组相比无统计学差异。④仔鼠生后14天时海马区脑组织的细胞凋亡及Bcl-2/bax在海马区脑组织的表达:模型组仔鼠海马区脑组织可见DNA降解片断,正常组和补肾细则未见。模型组仔鼠较正常组和补肾组比较,其Bcl-2表达下调,bax表达上调。⑤仔鼠生后14天时海马区脑组织内CHAT和Ache的活力:模型组仔鼠AchE、CHAT的活力较正常组和补肾组样本高(P<0.01)。正常组和补肾组相比无统计学差异。⑥仔鼠生后14天时BDNF在海马区脑组织的表达:模型组仔鼠BDNFmRNA的半定量表达较正常组和补肾组下降,正常组和补肾组相比无差异。 结论 本课题首次提出了“肾主脑发育”的观点,并从肾对脑的结构和功能影响的角度进行了深入的理论探讨。本实验采用“恐伤孕鼠”的方法成功复制出肾精亏虚模型,发现模型组仔鼠具有先天肾虚的表现,其脑发育存在明显的障碍,中药补肾填精方可有效阻断肾虚对脑发育的影响。模型组仔鼠血清TH含量显著下降,伴随着BDNF和Bcl-2表达下调,bax表达上调,CHAT和Ache活力升高。


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