湖北恩施产厚朴的品质研究

【摘要】： 湖北恩施是中药厚朴的传统道地产区，恩施厚朴俗称“紫油厚朴”，其内表面深紫色、断面棕色、皮厚、质细、香气浓、油性重，属地道名优药材，原植物为木兰科厚朴(Magnolia officinalis Rehd．et Wils．)。为深入研究恩施厚朴的品质与鉴别，本文探讨了厚朴的功效及其物质基础，对恩施厚朴有效成分及有效部位进行了定量分析，比较了不同产地、品种间厚朴酚与和厚朴酚的含量，建立了恩施厚朴的HPLC指纹图谱及DNA指纹图谱。 将历代医籍和本草著作中有关厚朴功效的论述与现代化学成分分析、药理药效研究的成果相结合进行分析研究，结果表明，厚朴的功效为“下气消胀，化湿除满”。其有效成分主要有三类：①酚类成分，主要为厚朴酚、和厚朴酚等；②挥发油类成分，主要是桉醇、丁香烯等单萜、倍半萜及其含氧衍生物；③生物碱类成分，主要是木兰箭毒碱、木兰花碱等。生物碱类同时也是厚朴的主要毒性成分。 采用高效液相色谱法测定来自不同树龄、不同部位、不同加工方法以及不同产地、不同品种的厚朴样品中厚朴酚、和厚朴酚含量，流动相为甲醇-水(78:22)，检测波长为294nm。结果表明，恩施厚朴随树龄增长，厚朴酚与和厚朴酚总含量下降；树龄相同，酚含量与胸径、皮厚呈正相关；根皮的酚含量远高于干皮和枝皮，干皮自下而上酚含量逐渐降低，枝皮的酚含量比中上部干皮的高；发汗能使酚含量大幅提高。不同产地、品种间比较，则恩施厚朴的厚朴酚与和厚朴酚含量最高。 采用《中国药典》的挥发油测定法、气相色谱-质谱联用法对恩施厚朴的挥发油类成分进行定性与定量分析。结果表明，同一植株上枝皮挥发油含量远高于根皮和干皮，干皮自下而上含量逐渐升高，茎基部含量最低；树龄不同，挥发油含量各异，以5年生与20年生者为高。挥发油中单萜、倍半萜含氧衍生物含量以15年生者为最高，20年生干皮发汗品的含量次之。 采用非水溶液滴定法，探索思施厚朴中生物碱的积累与分布规律。结果表明，随着树龄增长，生物碱含量下降；同一植株，根皮生物碱含量最高，干皮最低；发汗使干皮的生物碱含量进一步降低。 采用《中国药典》的浸出物测定法测定恩施厚朴的水溶性浸出物量(冷浸法)，考察不同部位、不同生长年限、不同产地加工对厚朴浸出物的影响。结果显示，同一厚朴株，干皮与枝皮浸出物较多，根皮较少；树龄增长，浸出物呈下降趋势；发汗能使浸出物显著增加。 采用HPLC法研究恩施厚朴的化学成分指纹图谱。色谱条件：CosmosilC_(18)-MS-Ⅱ色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相甲醇-水(67:33)溶液，流速1.0mL·min~(-1)，柱温25℃，检测波长230nm；记录恩施产厚朴10批样品(干皮)的HPLC图谱，进行图谱相似度比较和特征性分析。结果表明，恩施厚朴个体间指纹图谱相似度高(＞0.92)；建立恩施厚朴的对照用指纹图谱；确认特征峰5个，其中峰5与峰4峰面积的比值、峰4与峰5峰面积之和占总峰面积的比例，可分别作为恩施厚朴(干皮)的HPLC图谱特征(特征Ⅰ、Ⅱ)。 采用ISSR标记技术对厚朴基因组DNA进行PCR扩增。结果2个ISSR引物即可构建湖北恩施产厚朴的ISSR指纹图谱。引物ISSR826的扩增产物中可见恩施厚朴特征带，分子量为950 bp及550 bp。因此，ISSR标记技术是区分厚朴药材产地和品种的有效方法。