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腰痛定体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的观察

谢义雄  
【摘要】: 目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)在体外分离培养、增殖,以及在中药环境下诱导向神经细胞定向分化,探索神经组织工程修复中的中药应用前景。 方法 自SD大鼠取大鼠骨髓间充质干细胞进行体外原代培养,选用第3代细胞分为中药实验组、西药对照组和空白对照组共3组,其中中药实验组加入中药腰痛定诱导培养大鼠MSCs定向神经细胞分化,西药对照组加入β-巯基乙醇诱导培养大鼠MSCs定向神经细胞分化,空白组原条件培养。三组分别在光镜下观察细胞形态以及采用链霉亲和素-生物素酶复合物法(SABC)对细胞的种类加以鉴定,鉴定表达神经元特异性蛋白的NSE和nestin,光镜下记数胞,计算阳性细胞百分率。分别对三组的实验结果比较分析,得出结论。 结果 用含10%胎牛血清(FBS)的L-DMEM培养MSCs,原代细胞贴壁生长,传代培养增代至第3代时分别用含有腰痛定的无血清L-DMEM培养基和用巯基乙醇诱导培养,随时间的推移可见细胞有明显的形态学改变,胞体收缩,折光性增强,细胞出现多突起。5h后大部分细胞呈现多角形、锥形或星形,并出现二级分叉,与神经细胞类似,然后细胞增殖由快变慢。MSCs经诱导后丧失增殖能力,但仍可在体外继续存活2周左右。MSCs经诱导分化后,免疫组化分析显示NSE阳性,分化为神经元样细胞。 结论 本研究以中药有效成分体外定向诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化具有探索性,创新性。腰痛定中的有效中药成分不仅可以使MSCs定向分化为较原始的神经细胞,而且有助于神经细胞的长期存活。腰痛定有效中药成分对MSC长期生长分化无毒,可作为进一步临床神经细胞移植的比较理想的诱导剂。


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