黄白抑瘤方对人直肠癌细胞增殖和凋亡的影响

【摘要】： 目的 大肠癌是目前最常见恶性肿瘤之一,近年来我国的大肠癌的发病率呈上升趋势。祖国医学认为直肠癌的形成是湿热蕴结日久化毒下注,积聚于肠道凝结而成肿瘤。湿热下注、火热内蕴、结而为肿是病之标;正气不足、脾肾两亏为病之本。中医药治疗大肠癌是目前国内肿瘤治疗领域一大优势,大量实验及临床案例证明,中医药辅助治疗可以有效减轻放化疗副作用。我们在临床研究中,按照清热解毒、益气养阴、活血燥湿的治疗原则,用黄白抑瘤方口服及局部治疗该病取得了较好的临床疗效。在本实验中,我们拟采用人结直肠癌细胞株Colo320为研究对象,观察黄白抑瘤方在体外对Colo320细胞的抗肿瘤作用研究,探讨黄白抑瘤方对Colo320细胞增殖、凋亡,及其相关蛋白表达的影响,以明确黄白抑瘤方治疗结直肠癌的生物学基础。 方法 使用不同浓度黄白抑瘤方体外干预Colo320细胞。采用甲基噻唑MTT比色法和生长曲线测定不同浓度黄白抑瘤方对Colo320细胞的增殖的影响。采用流式细胞术检测不同浓度黄白抑瘤方对Colo320细胞周期和凋亡率的影响,并与对照组细胞的凋亡率比较,以显示黄白抑瘤方作用与细胞凋亡率之间的关系;Western blot检测不同浓度黄白抑瘤方处理后Colo320细胞的增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA),以及凋亡相关蛋白Caspase3和PARP的表达。 结果 黄白抑瘤方作用Colo320细胞24h后,经MTT法检测,OD值明显小于对照组,显示不同浓度药物具有不同程度的肿瘤抑制率;黄白抑瘤方作用Colo320细胞48h后,与对照组相比,细胞周期分布发生明显改变,表现为S期细胞比例下降,G0/G1期和G2/M期细胞比例上升,凋亡率明显升高;黄白抑瘤方作用Colo320细胞48h后,与对照组相比,PCNA含量显著减少,而凋亡相关蛋白Caspase 3和PARP含量显著增加。 结论 黄白抑瘤方能抑制人直肠癌Colo320细胞增殖,并诱导促进细胞凋亡,从而达到抗肿瘤的作用。