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苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒感染对Sf9细胞周期的影响

王颖  
【摘要】: 病毒的感染会导致细胞内部发生一系列变化,这些变化可能与细胞周期时相有关,因而检测细胞的周期时相是研究病毒感染引起细胞各种变化的重要条件。用抑制剂将细胞同步,释放细胞,应用流式细胞仪FACS的荧光检测,测定了Sf9细胞周期,Sf9细胞完成整个周期循环大约需要18h,G_1、S、G_2/M各时相的时间间隔约为6h。 AcNPV感染Sf9细胞18-36h,细胞被抑制于G_2/M期;Sf9细胞同步于G_1/S期后释放细胞并用AcNPV感染,18h后,2/3的细胞处于G_2/M期,1/3的细胞处于S期。不管是正常Sf9细胞还是同步Sf9细胞,受到病毒感染后,均产生>4N DNA的异倍体细胞。实验表明异倍体细胞的产生是由于病毒DNA复制造成。 用不同抑制剂首先将Sf9细胞分别同步于G_1/S期、G_2/M期,然后感染AcNPV,发现处于G_1/S期的Sf9细胞对病毒的敏感性高于G_2/M期的细胞。敏感性的差异可能是因为在病毒感染过程中宿主细胞的状态、周期时相影响病毒复制效率与病毒的增殖产物。 病毒感染诱导的细胞周期抑制可能是由病毒的极早期基因表达产物引起的。我们用AcNPV的ie1基因转染Sf9细胞表达,FACS分析证实ie1基因的单独转染表达12-16h逐渐有大部分细胞的细胞周期被抑制于G_2/M期,并且引起20-30%的细胞凋亡。 三种杆状病毒棉铃虫核型多角体病毒(Heliothis armigeranucleopolyhedrovirus HaNPV)、斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera lituranucleopolyhedrovirus SINPV)、芹菜夜蛾核型多角体病毒(Synrapha falciferanucleopolyhedrovirus SfaNPV)的DNA转染Sf9细胞表达,FACS分析表明三种杆状病毒HaNPV、SINPV、SfaNPV的DNA的转染表达,均在12-16h后将70%的Sf9细胞的细胞周期抑制于G_2/M期,同时引起10-15%的细胞凋亡。 用AcNPV感染Sf9细胞,48h取样,发现被病毒感染后的Sf9细胞 dA 硕士学住论文 Q一少 M工队’Sn旧IS CyClinB、CyClinD3的阳性表达率、表达量与正常细胞的截然不同。ACNPV的 感染导致 Sffi细胞 cyclinB;心。持续高水平表达。将 Sfg细胞抑制在 GO/ G; 期再用ACNPV感染Sfg细胞,48 h取样,结果与上述基本相同。两种周期蛋 白在细胞受到病毒感染后的异常表达行为可能是病毒阻滞细胞周期的手段或 勾 结果。


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