利用RAPD和18SrDNA基因序列对几种索科线虫系统发育分析

【摘要】：索科线虫是一类昆虫寄生线虫,其形态多样而且具有较高的宿主特异性。由于这类昆虫病原线虫具有重要的生防价值,所以有必要研究它们的遗传变异和系统演化。本文首次报道了有关中国的索科线虫的分子系统发育关系,对索科线虫中的部分分类混淆问题进行了分析,为更完善地构建索科线虫系统进化树奠定了一定的理论基础。 本文采用RAPD技术构建了索科线虫4属5种的指纹图谱。从47个引物中筛选出12个稳定性好、多态性高的引物,共扩增出161条谱带,其中150条谱带具遗传多态性,占93.17%。所获片段长度大小为200-3200bp,单个引物扩增的条带数在11～16间,平均为13.42条。采用RAPDistance软件及MEGA程序,计算Nei氏相似系数和遗传距离,建立了UPGMA和NJ聚类图。两个聚类图拓扑结构基本相同,将5种索科线虫可分为两大分枝:同属于蚊幼寄生罗索属(Romanomermis)的食蚊罗索线虫(R.culicivorax)与武昌罗索线虫(R.wuchangensis)亲缘关系最近,先聚在一起;再与同翅目(Homoptera)寄生长沙多索线虫(Agamermis changshaensis)聚为一枝;鳞翅目(Lepidoptera)寄生中华卵索线虫(Ovomermis sinensis)和同翅目寄生两索属线虫(Amphimermis sp.)亲缘关系较近,两者聚为一枝。从5种索线虫之间的遗传距离来看,属内种间的距离较小,食蚊罗索线虫与武昌罗索线虫之间遗传距离仅为0.1789;而属间的遗传距离较大,在0.4471～0.5488之间。结果表明:RAPD技术可以应用于索科线虫亲缘关系的分析,能够反映出不同线虫间的遗传差距,从而进行属、种的分类及进化问题研究。 本文比较了13种索科线虫(其中8种索科线虫序列为本文所测定,5种索科线虫序列从互联网GenBank检索得到)的18S rDNA的同源序列。计算核苷酸的使用频率,并采用邻接法(NJ)和最大简约法(MP)构建分子系统发育树。在获得的773bp的序列片段中有200个位点为多态性位点,大部分的碱基改变是转换(transition)。研究结果表明:用两种方法构建的系统树结果基本一致,索科线虫分为两大类群,第一大类群是以罗索属武昌罗索线虫