鳞翅目昆虫细胞系的DNA指纹图谱法鉴定及对SfaMNPV敏感性的测定

【摘要】： 细胞系的生物学特性研究对于细胞库的建立和生物制药是非常重要的,细胞系特性提供了细胞系家系的特点,形态特征,生化特征,遗传稳定性以及细胞系交叉污染的相关信息。细胞系的鉴定方法包括细胞特异性指标的分析。昆虫细胞系广泛应用于昆虫病毒培养和重组蛋白生产的科学研究以及工业生产,与哺乳动物细胞系相比,昆虫细胞系被报道交叉污染和错误标记的例子更多。本论文作者主要通过DNA指纹图谱技术鉴定17种鳞翅目昆虫细胞系并检测这些细胞系对芹菜夜蛾核型多角体病毒的敏感性。DNA指纹图谱是通过使用随机引物进行DNA扩增技术获得的,指纹图形是细胞系的一个稳定性参数。根据醛缩酶(aldolase),催乳素受体(prolactin receptor)和白细胞介素-1β(interlukin-1β)三个不同基因,设计三组不同的引物,从细胞中提取DNA,分别以每一种细胞系DNA为模板,PCR扩增,PCR产物琼脂塘凝胶电泳检测,从而获得完整的DNA指纹图谱。实验结果显示,除棉铃虫建立的BCIRL-HA-AMI产生了和甜菜夜蛾(Le-H-HNU7)一样的DNA指纹图形外,所有的细胞系都产生不同的DNA指纹图谱,它们可以彼此区分。BCIRL-HA-AMI和Le-H-HNU7的一致性图谱,可能是标记错误或交叉污染造成的;对Bt晶体毒素敏感的粉纹夜蛾BTI-TN5B1-4(TnH5—S)细胞和TnH5—R抗性细胞系的DNA指纹图谱是有差异的。本文作者使用TCLD_(50)法测定了六种细胞系对芹菜夜蛾核型多角体病毒的敏感性。用梯度稀释的病毒悬浮液(SfaMNPV)接种培养于96孔细胞培养板中的粉纹也蛾BTI-TN5B1-4(TnH 5—S),草地夜蛾Sf9,斜纹夜蛾(SL-ZSU-1),小菜蛾BCIRL-PX2-HNU3,舞毒蛾IPLB-Ld652和美洲棉铃虫(BCIRL-Hz-AMI)细胞,27℃孵育,逐日记录阳性感染数。数据用按Reed—Muench法分析,得到了不同细胞感染的病毒滴度。病毒感染Sf9细胞得到的病毒滴度是5×10~7 TCID_(50)/ml,BTI-TN5B1-4(TnH 5-S)细胞病毒滴度是3.2×10~7 TCID_(50)/ml。在SL-ZSU-1,BCIRL-HZ-AMI,IPLB-Ld652和BCIRL-PX2-HNU3细胞中没有被检测除病毒粒子或病毒多角包涵体