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金魁猕猴桃快速无性繁殖与无内生细菌植株培养

詹婧娴  
【摘要】:猕猴桃营养丰富,特别是维生素C含量高,是世界上主要水果之一。由丁香假单胞杆菌猕猴桃变种细菌引起的溃疡病是猕猴桃种植的最大威胁,发病严重时可以毁灭果园。目前猕猴桃溃疡病在我国猕猴桃主要产区、主要栽培品种中都有发现,并呈逐年加重之势。建立猕猴桃离体再生与繁殖技术不仅可以用于快速繁殖优良猕猴桃品种和猕猴桃转基因研究,而且还可以用于培育无病毒、无溃疡病病原菌的猕猴桃植株。美味猕猴桃‘金魁’具有品质佳、丰产性好、抗逆性强、耐贮运、货架期长等优点,近十多年来是我国猕猴桃的主栽品种之一。但'金魁'猕猴桃扦插生根比较困难,生产上常用嫁接繁殖。本项目以'金魁'猕猴桃茎段和成熟叶为外植体,研究了植物生长物质、基本培养基对不定芽的诱导、芽的增殖与生根的影响,以及组培苗移栽技术;在此基础之上,以带内生细菌的芽为材料,研究了脱除组培苗中内生细菌的方法,主要取得了以下结果。1.对果园生长的'金魁'猕猴桃枝条进行表面消毒后,将枝条切成带芽的茎段,接种在含0.5mg/L BA(6-苄基氨基嘌呤)和0.1mg/L IBA(吲哚丁酸)的1/2 MS培养基(大量元素减半的MS培养基)上,大约43%的茎段长出新的幼茎,但所有茎段基部出现黄色或者白色细菌污染。将幼茎切下接种到新鲜的培养基上后,所有幼茎基部切口处也全部出现细菌污染。这表明本试验所用的'金魁'猕猴桃枝条的内部带菌严重。2.在 1/2 MS 培养基上,0.2 mg/L NAA(萘乙酸)和 1-5 mg/L BA 或 1-2 mg/L TDZ(噻苯隆)的组合均可以诱导'金魁’猕猴桃成熟叶形成愈伤组织和不定芽,但效果差异很大,TDZ比BA更有利于不定芽的诱导。在含0.2 mg/L NAA和5 mg/L BA的培养基上,愈伤组织诱导率为100%、不定芽诱导率为50%,而在含0.2 mg/L NAA和1 mg/L TDZ的培养基上,愈伤组织诱导率为100%、不定芽诱导率为92%。3.在含细胞分裂素的增殖培养基中添加0.3-0.5 mg/L赤霉素(GA3)可以显著促进芽的伸长,提高增殖效率。同对照相比,0.3-0.5 mg/L赤霉素可以使繁殖系数提高3-4倍。3.在含细胞分裂素的增殖培养基中添加0.3-0.5mg/L赤霉素(GA3)可以显著芽的伸长,因而使芽的繁殖系数提高3-4倍。4.将伸长的芽切成带芽的小段(茎段)接种在含不同种类、不同浓度细胞分裂素的增殖培养基(含0.3 or 0.5mg/L GA3)上,发现BA比TDZ、激动素(KT)、玉米素(ZT)能更有效地促进芽的增殖,最佳浓度为0.3-0.5mg/L;在含0.3mg/LGA3和0.3或0.5 mg/LBA培养基上,每个茎段上的芽均能生长、伸长,形成新幼茎,并且新幼茎上的1-2个侧芽也能生长伸长,一个月可以增殖4.5倍以上。5.在相同的BA和NAA组合下,MS培养基比B5,CF和WPM等基本培养基更有利于'金魁'猕猴桃芽的增殖。6.增殖培养基上所增殖的幼茎(2-3 cm长)在含0.7或1 mg/LIBA的1/2MS培养基上可以100%的生根,再生植株平均有5.2和8.5条根。但在含1 mg/L IBA培养基上,许多再生植株基部形成较大的愈伤组织,而且根多由愈伤组织形成;而在含0.7 mg/L IBA培养基上,再生植株无明显的愈伤组织,根直接从幼茎基部发生。7.在含0.7 mg/L IBA培养基上再生的植株经过温室里炼苗一个月后,移到室外自然环境,生长健壮,移栽三个月后的成活率达到96%。8.以带内生菌的幼茎为材料,分离不同大小的茎尖在含1 mg/LBA和0.2mg/LNAA的MS培养基上进行脱菌培养。发现0.5 mm长的茎尖脱菌效果较好。通过对脱菌芽进行四代培养,可以得到没有内生细菌的无菌芽。脱菌芽及其再生植株的脱菌效果通过细菌培养和PCR方法得到证实。


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