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乳酸含量的酶法测定

庹浔  
【摘要】: L-乳酸又称2-羟基丙酸,是以淀粉为原料,经过生物发酵精制而成的一种有机酸,为无色澄清粘性液体,水溶液显酸性。与水、乙醇或乙醚能任意混合,在氯仿中不溶。煮沸浓缩时酸合成乳酰乳酸,稀释并加热水解成乳酸。因其左旋的特征,具有很好的生物相容性,能与哺乳动物相容,可直接参与人体代谢而无任何副作用,被广泛应用于食品、医药等领域。在食品行业中主要用于糖果,饮料(如啤酒,葡萄酒及乳酸类饮料)等食品加工业中,作为酸味剂及口味调节剂,被称为绝对安全的食品添加剂。另还可用于清凉饮料、蔬菜的加工和保藏;在医药行业中L-乳酸是一种重要的医药中间体;在临床检验中,乳酸浓度可反映组织血液灌流衰竭的严重程度,可作为组织缺氧的定量指标。因此,乳酸的定量分析在临床、食品等科学中有重要意义。近年来酶分析法在生物分析化学中得到了广泛的应用,已成为生命科学研究中的基础手段之一。 本论文分为四个部分,内容如下: 第一章概述了乳酸的定量分析方法及酶法分析的理论知识和研究应用。 第二章研究了以紫外分光光度法为检测技术,酶催化动力学测定乳酸的方法。在Tris-Hcl-水合肼缓冲液中(pH=9.2),利用乳酸在氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)存在的条件下,由乳酸脱氢酶(L-LDH)催化生成丙酮酸和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)。通过测定NADH在340nm处吸光度的变化率,可得出酶促反应速度,并制得标准曲线,样品中的乳酸可由标准曲线求得。讨论了试剂用量、pH、温度和共存离子对测定的影响。并测定了小牛血清、啤酒和白醋中乳酸的含量。 第三章研究了酶催化动力学荧光法测定乳酸。基于L-LDH催化下列反应:乳酸+NAD+ L-LDH丙酮酸+NADH,利用NADH是一种强荧光物质,而NAD+则无荧光的性质,通过测定NADH荧光值的变化率得出其酶促反应速度,对应不同乳酸浓度制得标准曲线,从而可测出试样中的乳酸量。用该法测定了小牛血清、白酒和优酸乳中乳酸的含量,结果满意。 第四章研究了反胶束溶液中的乳酸脱氢酶催化动力学性质及用于乳酸的测定。讨论了反胶束的含水量、pH、表面活性剂用量、助溶剂用量等对LDH固定化的影响。研究表明乳酸脱氢酶在反胶束体系中构象发生变化,但其生物活性保持良好。对游离酶和反胶束固定化酶的动力学特性研究表明:反胶束中LDH与水介质中相比稳定性和耐热性均有提高。并应用该体系对样品中乳酸含量进行了测定。


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