收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

基于纳米颗粒的植物转基因及其检测研究

刘俊  
【摘要】:纳米颗粒作为基因载体和药物载体在动物细胞的研究中取得了初步进展,这是纳米生物技术所取得的主要成果之一。但是,纳米生物技术在植物生命活动中研究相对较少,有待开发其潜在的应用价值。因此,本研究以具有生物相容性的多聚赖氨酸淀粉纳米颗粒(poly-L-lysine starch nanoparticle,PLL-StNP)为基因载体进行了植物转基因技术的研究,并就该技术相关的基础性科学问题进行了初步探讨,同时,将纳米颗粒与分子信标(molecular beacon, MB)结合,对目标基因及其表达进行活体、实时、超灵敏检测的研究,以实现在纳米尺度和单分子水平上获取生命活动过程的信息。通过研究,建立了基于纳米颗粒的植物转基因及其检测的新方法。 1.纳米颗粒基因载体的制备及其特性 纳米颗粒基因载体的制备:以可溶性淀粉为原料,制备了淀粉纳米颗粒(starch nanoparticles, StNPs)。以该纳米颗粒为内核,经多聚赖氨酸修饰,得到了多聚赖氨酸淀粉纳米颗粒(PLL-StNPs)。在原子力显微镜下检测到这些颗粒的大小为50 nm左右,分散均匀。在pH 7-8的范围内,PLL-StNPs带正电荷。 纳米颗粒与DNA的结合:在PLL-StNPs溶液中加入质粒DNA,凝胶电泳分析,PLL-StNPs能有效结合DNA,而且PLL-StNPs能同时结合不同种类的DNA。洗脱复合物中的DNA,凝胶电脉分析,DNA条带没有改变,说明DNA能结合在PLL-StNPs上,也能从复合物上分离,因此,PLL-StNPs可用作多基因载体。将PLL-StNPs进行RuBPY修饰, RuBPY修饰的NPs仍能有效结合DNA。 纳米颗粒对DNA的保护作用:结合了DNA的NPs在超声波发生器中处理不同的时间后,进行凝胶电泳分析发现DNA仍与NPs结合。洗脱复合物中的DNA,经电泳发现DNA条带没有改变,表明NPs能有效地保护DNA防止超声波的破坏。用DNase I消化DNA-NPs复合物,洗脱复合物中的DNA,进行凝胶电泳分析,发现DNA条带均没有改变,实验结果表明DNA-NPs能较好地保护DNA防止DNase I的酶切。 纳米颗粒与植物细胞的生物相容性:在高渗作用或超声波介导下,将RuBPY修饰的PLL-StNPs导入盾叶薯蓣细胞,在激光共聚焦显微镜下观察发现,荧光纳米颗粒进入了植物细胞,主要分布在细胞质中,随着培养时间的延长,细胞中荧光纳米颗粒数目减少,荧光强度也减弱; 将有荧光纳米颗粒的细胞培养3~5天,在激光共聚焦显微镜下观察细胞中仍有荧光,但荧光的强度随着时间的延长而减弱,同时可在分裂的子细胞中观察到微弱的荧光。说明NPs能有效进入植物细胞,


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 ;植物转基因疫苗[J];中国兽药杂志;2003年02期
2 李红,吴丽芳,余增亮;植物转基因技术(一)[J];安徽科技;1999年06期
3 李红,吴丽芳,余增亮;植物转基因技术(三)[J];安徽科技;1999年08期
4 李红,吴丽芳,余增亮;植物转基因技术的发展及应用[J];华东科技;1999年06期
5 E.R.Ward ,J.A.Rayls ,B.J.Miflin ,戴秉丽;植物转基因表达的化学调控[J];生物技术通报;1994年01期
6 崔广荣;植物转基因方法及特点和转基因沉默现象[J];安徽技术师范学院学报;2003年01期
7 徐星明,赵成章;植物转基因的进展与禾谷类作物转基因的评估[J];植物学通报;1992年04期
8 高俊山,林毅,叶兴国,马传喜;植物转基因技术和方法概述[J];安徽农业科学;2003年05期
9 ;河北省农林科学院遗传生理所 植物转基因中心[J];华北农学报;2007年04期
10 王彩虹,米凯霞,佘锐萍;植物转基因疫苗[J];中国预防兽医学报;2002年01期
11 李红,吴丽芳,余增亮;植物转基因技术(二)[J];安徽科技;1999年07期
12 王海波,赵和;转基因植物研究开发的国内外现状[J];河北农业科学;2001年01期
13 李林川;韩方普;;人工染色体研究进展[J];遗传;2011年04期
14 陈祯;高等植物转基因研究[J];生物学通报;2002年08期
15 ;十五“国家转基因植物研究与产业化”专项取得丰硕成果[J];农业科技通讯;2007年02期
16 杜娟,季静,王罡,胡汉桥;基因枪在植物遗传转化中的应用[J];吉林农业科学;2000年02期
17 刘苗霞;张颜睿;付凤玲;;标记基因在植物转基因中的安全性研究[J];安徽农业科学;2011年28期
18 王启燕,卢铁军;禾谷类植物转基因技术研究进展[J];黑龙江农业科学;2003年05期
19 翟敏;魏华丽;;植物转基因沉默现象的发生机制[J];陕西农业科学;2010年01期
20 王鹏;韦月平;;β-Glucuronidase在植物基因功能研究中的应用[J];吉林农业科技学院学报;2006年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孙丹;;植物转基因技术风险的预防[A];生态安全与环境风险防范法治建设——2011年全国环境资源法学研讨会(年会)论文集(第二册)[C];2011年
2 金凤;党利洁;李姝;柴文婷;李鹏丽;王宁宁;;紫色幼叶和紫色叶脉融合基因及其作为可视筛选标记基因在番茄转化技术中的应用[A];植物分子生物学与现代农业——全国植物生物学研讨会论文摘要集[C];2010年
3 ;植物分子遗传国家重点实验室[A];培育生物产业,发展绿色经济——第五届中国生物产业大会·2011基因科学与产业发展论坛会刊[C];2011年
4 卫志明;;转基因植物(transgenic plant)研究进展[A];中国植物生理学会全国学术年会暨成立40周年庆祝大会学术论文摘要汇编[C];2003年
5 张丽;甘智才;胡清泉;玉永雄;;苜蓿中光诱导型启动子柠檬酸合成酶基因的过量表达及其对铝耐受力的提高[A];第三届中国苜蓿发展大会论文集[C];2010年
6 佘建明;袁希汉;苏小俊;李彬;;培育抗虫不结球白菜新材料[A];中国植物生理学会全国学术年会暨成立40周年庆祝大会学术论文摘要汇编[C];2003年
7 胡风庆;;糖皮脂激素介导的植物基因人工表达调控系统[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
8 袁鹰;刘德璞;郑培和;温钢;陈一斌;徐文静;;影响东北玉米自交系基因枪转化瞬时表达的因素[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
9 朱学艺;崔素霞;王锁民;;C_3植物芦苇响应生境变化的C_4光合特征[A];中国植物生理学会全国学术年会暨成立40周年庆祝大会学术论文摘要汇编[C];2003年
10 李建粤;毛万霞;吕英海;杨丽君;;利用共转化技术改良水稻食味品质的研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 熊爱生;标记基因的克隆、化学合成和体外定向分子进化及其在果树基因工程中的应用研究[D];南京农业大学;2007年
2 丁如贤;Bt和CpTI双价抗虫基因共转化菘蓝提高对害虫抗性的研究[D];第二军医大学;2007年
3 张春宝;栽培大豆非生物胁迫诱导的蛋白激酶基因GmGSK的克隆及功能分析[D];东北师范大学;2010年
4 唐宏琨;激发子基因peaT1转化棉花和烟草体系的建立及功能分析[D];中国农业科学院;2010年
5 林拥军;农杆菌介导的水稻转基因研究[D];华中农业大学;2001年
6 朱东姿;AtDEAHb3基因编码DEAH-box RNA解螺旋酶参与拟南芥雌配子体的发育[D];山东农业大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 许潇;电晕放电介导大豆DNA转化羊柴的初步研究[D];内蒙古大学;2009年
2 邓顺阳;黑麦草抗冻蛋白基因的克隆、原核表达及植物转基因研究[D];中南林业科技大学;2010年
3 寿建昕;水稻果胶甲基酯酶基因的克隆及表达研究[D];浙江大学;2007年
4 丁敏;抗双翅目Bt杀虫基因GFMcry11B的人工合成、原核表达及植物转基因的研究[D];华中农业大学;2003年
5 陈玲玲;离子束介导大豆DNA转化羊柴的初步研究[D];内蒙古大学;2008年
6 徐丹;AtNHX1基因的分离与耐盐性验证[D];黑龙江大学;2009年
7 闫虎斌;柑桔衰退病RNAi/PTGS载体的构建及转化酸橙研究[D];西南大学;2008年
8 姜云水;CTB基因和CTB-ureB融合基因水稻表达载体的构建及其转化[D];浙江大学;2004年
9 刘红霞;小豆再生体系建立及铁吸收基因转化条件初步分析[D];甘肃农业大学;2010年
10 孔莹莹;利用新型转基因载体消除植物转基因中的同源共抑制现象[D];浙江大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 科技部技术预测与国家关键技术研究;植物转基因技术可增加农民收入[N];经济参考报;2004年
2 中国农科院生物技术研究所 王琴芳;转基因植物产业化发展与对策[N];中国特产报;2001年
3 李作明;跨世纪梦想:用苍蝇治病[N];中国社会报;2001年
4 李明;浙江传统农业不再“传统”[N];中国乡镇企业报;2001年
5 ;中国农大建立“转基因植物基地”[N];科技日报;2002年
6 朱翔 杨先慧 黄桂清;“红太阳”成功培育出基因棉种“南抗3号”[N];江苏经济报;2000年
7 本报记者 薛冬  通讯员 潘楠;我国何以开展转基因抗虫棉研究[N];光明日报;2002年
8 本报记者 周爱国 董华容;龙腾在即[N];亚太经济时报;2000年
9 记者 陈蕊;我省将大力发展生物技术产业[N];江苏经济报;2005年
10 记者刘莉;“转基因食品”是魔鬼还是天使?[N];科技日报;2002年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978