收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

博落回主要生物碱的分离、纯化及生物活性研究

钟明  
【摘要】:中药博落回(Macleaya cordata (Willd) R.Br.)属罂粟科博落回属植物,富含多种异喹啉类生物碱,如血根碱(sanguinarine, SA),白屈菜红碱(chelerythrine, CHE),原阿片碱(protopine, PRO)和别隐品碱(allocryptopine, ALL)等。它们具有显著而丰富的生物活性与药理活性,在抗癌、杀菌、杀钉螺、治肝病等方面具有广阔的应用前景。本论文以博落回生物碱作为研究对象,在前人工作的基础上,围绕博落回中的四种高活性异喹啉类生物碱的分离、纯化,生物活性及其缓释制剂开发等内容展开研究。 为系统研究博落回中生物碱的理化性质,首先建立了博落回生物碱单体的分离、纯化方案,采用溶剂法和柱层析法,从博落回果荚中分离出八种异喹啉类生物碱,并通过1H-NMR,13C-NMR和ESI-MS分别鉴定为:原阿片碱、别隐品碱、隐品碱、血根碱、白屈菜红碱、二氢血根碱、氧化血根碱、二氢白屈菜红碱。采用溶剂提取和控制pH值分离为主要方法,初步建立了原阿片碱,别隐品碱,血根碱和白屈菜红碱单体的分离、纯化方案,该技术为博落回生物碱的开发与高值化利用提供了有益的参考。 采用超高效液相色谱-电喷雾-质谱(UPLC-ESI-MS)联用技术,建立了博落回生物碱全分析方法,为博落回药材质量控制提供了重要依据。该分析方法能快速、高效检测多种生物碱在博落回各部位中的含量,样品全分析时间(11 min)约为常规HPLC分析时间(45 min)的1/3,且比常规HPLC分析法具有更高的灵敏度和更少的溶剂消耗。利用本文建立的分析方法,检测了博落回植物各部位及九种不同来源的博落回果荚中生物碱的含量。结果表明,博落回果荚中八种生物碱是含量较高的生物碱,其中的血根碱是含量最高的一种。实验还发现,不同来源的博落回果荚中生物碱含量差别较大,提示生物碱含量的变化可能是导致不同来源的博落回临床疗效差异的主要原因之一。 博落回生物碱在血吸虫防治方面具有良好的应用前景,因此本文以博落回中提取的血根碱硫酸氢盐(BSAN)和白屈菜红碱硫酸氢盐(BCHE)及二者的比例混合物(BTA)为药剂,研究了博落回生物碱杀灭钉螺的活性,杀螺效果依次为:BSANBTABCHE,且BTA的杀螺效果表现出时间-剂量的依赖性。通过透射电镜研究了药物对钉螺肝细胞与生殖腺细胞超微结构的损害,发现螺肝和生殖腺均为BTA的靶器官。此项以博落回生物碱对钉螺肝细胞及生殖腺细胞超微结构影响的电镜研究目前未见报道。由于BTA杀螺的LC50值(0.69 mg/1,48 h; 0.40 mg/1,72 h)较低,其生产成本又很低廉,因此BTA有望作为一种很有潜力的植物源灭螺剂进行开发。 在抗肝纤维化药理实验中,主要针对博落回中提取的别隐品碱治疗小鼠日本血吸虫病肝纤维化的药理活性进行了研究。采用日本血吸虫尾蚴皮肤敷贴法成功建立了小鼠日本血吸虫病肝纤维化动物模型,并通过小鼠的急毒试验测定别隐品碱的LD50值为562.4 mg/kg。经别隐品碱给药治疗后,光学镜检的病理观察发现,中、高剂量组的小鼠肝细胞的纤维间隔较模型组明显减少,肉芽肿有所减轻,肝纤维化程度大多为Ⅰ至Ⅱ级。电子显微镜的超微结构病理研究表明,别隐品碱高剂量组的小鼠肝细胞的纤维分布减少,病变程度和病变范围均比模型组和吡喹酮组明显减轻。小鼠血清学肝纤维化指标与肝组织免疫组化指标的变化也显示,别隐品碱对小鼠日本血吸虫病肝纤维化具有一定的治疗作用,此项研究以前也未见报道。 为了研究博落回中的生物碱在体内与蛋白质等生物大分子的作用机理,采用荧光光谱技术测定了SA、CHE与牛血清白蛋白(BSA)的结合常数、结合位点数、作用距离、相互作用的热力学参数,研究了SA、CHE对BSA分子构象的影响。采用密度泛函理论中的B3LYP/6-31G*方法对SA、CHE的前线轨道进行了电荷分析,研究了分子结构与电荷分布对它们与BSA分子相互作用的影响。通过同源建模技术获得了BSA分子的空间结构,采用分子对接技术模拟了SA和CHE分子与BSA相互作用的空间构象和结合位点数,计算了SA和CHE分子与BSA相互作用的ΔG值分别为-30.29 kJ·mol-1和-29.45kJ·mol-1,分子模拟所得的结论与荧光实验结果较为接近。本实验为深入研究血根碱、白屈菜红碱与蛋白质的作用机理提供了实验和理论上的依据。 本课题还进一步研究了博落回生物碱的制剂技术,选取具有抗肿瘤作用的白屈菜红碱作为模型药物,以羧甲基壳聚糖(CMCS)为高分子载体材料,通过乳化化学交联法制备了包覆CHE·HC1的CMCS微球。并采用基于Box-Behknd设计的响应曲面法(response surface methodology, RSM)与满意度函数(Desirability)对CHE·HCl/CMCS微球制备工艺的主要参数进行了多目标、多响应优化研究。所得最佳制备工艺参数为:CHE·HCl/CMCS为20:1(g/g),油相/水相为3.37:1(v/v),CMCS浓度为2.30%,优化后的载药量为4.16%,包封率为57.4%。采用红外光谱(IR),扫描电镜(SEM), X射线衍射(X-Ray)和粒径分析(DSC)等手段对制备的载药微球进行了表征,并考察了CHE·HC1/CMCS载药微球的体外释放性能,证实了CHE·HC1/CMCS载药微球具有明显的缓释特性,其体外释放模型符合Higuchi方程。本实验为白屈菜红碱作为抗肿瘤缓释药物的开发与临床应用提供了可靠的依据。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前16条
1 毛鹏,周乐,冉晓雅,元超,王永学;博落回生物碱提取工艺初步研究[J];西北农业学报;2004年02期
2 李慧;肖佳尚;;博落回药材的提取工艺研究[J];中国药业;2009年12期
3 白靖文;丁良军;叶非;;植物源农药博落回超声辅助提取方法[J];农药;2010年12期
4 蔡建国;张涛;陈岚;;超临界CO_2流体萃取博落回总生物碱的研究[J];中草药;2006年06期
5 钟明;黄可龙;曾建国;黎霜;佘金明;张丽;;采用UPLC-ESI-MS快速测定博落回各器官中主要生物碱的含量[J];中南大学学报(自然科学版);2011年07期
6 杨军衡;毛小环;陈爱军;;中药博落回生物碱提取新工艺研究[J];湖南环境生物职业技术学院学报;2006年03期
7 郁建生;郁建平;;博落回总生物碱分离纯化工艺研究[J];中药材;2007年08期
8 易婷;申婷婷;李小明;曾光明;魏成;;Fenton/SBR组合工艺处理博落回提取废水研究[J];环境科学学报;2010年05期
9 居靖;王曙光;;愈肝灵胶囊的制备与质量控制[J];中国现代应用药学;2010年06期
10 章新军;杨峰钢;高致明;陈益银;王海明;;植物源农药防治烟草病虫害[J];烟草科技;2006年06期
11 张正付;郭莹;魏雄辉;;天然苄基异喹啉类抗肿瘤生物碱的筛选[J];中国中药杂志;2011年19期
12 王科;李红;;某铅锌尾矿植被特征及其重金属含量研究[J];萍乡高等专科学校学报;2009年03期
13 ;几种植物源农药在瓜果菜上的应用[J];山东农药信息;2009年02期
14 黄木荣;使用微孔滤膜的实践[J];中成药;1981年02期
15 韩志华,朱忠林,单正军;几种植物源农药对环境生物的毒性[J];应用与环境生物学报;2005年03期
16 ;农业部公告第1597号(新兽药注册目录)[J];北方牧业;2011年20期
中国重要会议论文全文数据库 前9条
1 贺喜;刘靖;张石蕊;成廷水;;博落回生物碱对黄羽肉鸡生产性能、内脏器官及肠道健康的影响[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
2 姚嘉赟;沈锦玉;;博落回杀灭小瓜虫活性成分的研究[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
3 钟明;曾建国;陈应庄;谈满良;罗炼辉;;博落回中微量生物碱的研究进展[A];2007年中华中医药学会第八届中药鉴定学术研讨会、2007年中国中西医结合学会中药专业委员会全国中药学术研讨会论文集[C];2007年
4 李玉峰;刘雨芳;尹友松;刘文海;李自君;;博落回乙醇提取物对福寿螺的毒杀作用研究[A];第三届全国生物入侵大会论文摘要集——“全球变化与生物入侵”[C];2010年
5 梁锋;张成功;马铭;陈波;姚守拙;;乳状液膜分离提取博落回中四种生物碱的研究[A];第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集[C];2006年
6 林先锋;;犬胃肠炎的诊治与体会[A];福建省科协第八届学术年会分会场“转变饲养方式,促进海西畜牧业和谐发展”学术年会论文集[C];2008年
7 王小莺;李麟;胡路峰;;复方苦参注射液的抑菌作用及急性毒性试验[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(下册)[C];2010年
8 雷国莲;刘静;刘贵州;满力华;;秃疮花的生药学研究[A];中华中医药学会第十届中药鉴定学术会议暨WHO中药材鉴定方法和技术研讨会论文集[C];2010年
9 郁建生;胡美忠;;生产工艺对草珊瑚注射液质量稳定性研究[A];第十届全国药用植物及植物药学术研讨会论文摘要集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 钟明;博落回主要生物碱的分离、纯化及生物活性研究[D];中南大学;2011年
2 曾建国;基于代谢框架和鲜药材的炮制“幼朴”与厚朴的等效性研究[D];湖南中医药大学;2010年
3 王丽薇;六种药用植物内生真菌的次生代谢产物及其生物活性研究[D];浙江大学;2011年
4 王慧;血根碱对大鼠小肠平滑肌收缩的抑制作用及信号传导通路研究[D];湖南农业大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘靖;博落回生物碱对黄羽肉鸡生长的影响[D];湖南农业大学;2010年
2 刘秀斌;博落回属植物中生物碱代谢累积研究[D];湖南农业大学;2012年
3 周浓林;博落回根化学成分及其活性研究[D];河北科技师范学院;2012年
4 肖会君;博落回化学成分及其生物活性研究[D];天津医科大学;2013年
5 林绿;博落回和鬼针草有效成分的提取工艺研究[D];浙江大学;2011年
6 潘萌;小果博落回中生物碱的提取分离及抑菌活性研究[D];西北农林科技大学;2012年
7 康伟松;博落回微量生物碱的分离纯化与结构鉴定[D];湖南中医药大学;2014年
8 贾晓;博落回内生真菌及其抑菌性研究[D];信阳师范学院;2011年
9 王斌;博落回中普罗托品和苯并啡啶类生物碱的结构修饰与抗菌活性研究[D];湖南中医药大学;2013年
10 万学攀;博落回生物碱成分分离及抑菌活性研究[D];西北农林科技大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前7条
1 陈先发;一项扶贫效益巨大的科技创新项目亟待资金支持[N];中国乡镇企业报;2001年
2 萧寒;“黄金项目”遭遇资金瓶颈[N];农民日报;2002年
3 本报通讯员 崔建安 本报记者 陆列嘉;我省光彩事业愈办愈旺[N];安徽日报;2001年
4 本报记者袁泉;安徽忙得别开生面[N];中华工商时报;2002年
5 储劲松;岳西推进县乡工业跨越式发展[N];安徽日报;2001年
6 邢台市兽医院 邢兰君;中西医结合治猪传染性胃肠炎[N];河北科技报;2009年
7 ;子猪黄白痢特效药——百痢金方[N];中国畜牧兽医报;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978