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改良HTK液灌注对无心跳供体猪心的保护作用

王霖  
【摘要】:第一部分无心跳供体猪心热缺血时限的探讨 目的:探讨可用于移植的无预处理的无心跳供体猪心热缺血时限。 方法:实验家猪21对(每对含供、受体各一只),共分成四组。S0组(对照组n=6例):供体心脏以Stanford液1000ml主动脉根部灌注,心脏停跳后立即切取供心,置于4℃Stanford液中保存2h;S15组(热缺血15 min组n=6例):心脏放血停跳,热缺血15min后,用4℃Stanford液1000ml灌注,切取供心,置于4℃Stanford液中保存2h;S30组(热缺血30mmin组n=6例):心脏放血停跳,热缺血30 min;S45组(热缺血45 mmin组n=3例):心脏放血停跳,热缺血45 min;S30组、S45组灌注及保存方法同S15组。各组均以双腔心脏移植方法行原位移植,监测供体心脏移植前后的血流动力学指标。测定心肌酶、肌钙蛋白I.ATP.心肌含水量等指标,以及电镜观察心肌组织超微结构改变。 统计学方法:比较两组之间的差异采用student t检验,多组间的差异比较采用方差分析。 结果:心脏移植实验中S0、S15、S30组均成功复跳,脱离体外循环辅助,S45组均无法复跳。与S0、S15组比较,S30组复跳时间、并行循环时间延长(P0.05)。S30组心输出量、ATP含量明显下降(P0.05),心肌含水量、心肌酶、肌钙蛋白Ⅰ明显升高(P0.05)。电镜观察超微结构S0、S15、S30组心肌有损伤,以S30组损伤较重,但结构尚完整。S45组电镜观察超微结构严重破坏,为不可逆改变。 结论: 1、常温失血30分钟内无预处理的无心跳供体猪心可用于心脏移植研究; 2、常温失血45分钟后,无预处理的无心跳供体猪心的心肌超微结构已经造成了不可逆转的严重破坏,不可用于心脏移植。 第二部分改良HTK液灌注对无心跳供体猪心的保护作用 目的:探讨改良HTK液灌注在热缺血30分钟无心跳供体猪心移植中的保护作用。 方法:实验家猪24对(每对含供、受体各一只),共分成四组。S0组(对照组n=6例):心脏以Stanford液1000ml主动脉根部灌注,心脏停跳后立即切取供心,置于4℃Stanford液中保存2h;S30(常规灌注组n=6例):心脏放血停跳热缺血30min后,用4℃Stanford液1000ml灌注,切取供心置于4℃Stanford液中保存2 h;SH30(HTK灌注组n=6例):心脏放血停跳热缺血30min后,灌注HTK液1000ml,切取供心.置于4℃HTK液中保存2h,心脏复跳前灌注500ml去白细胞血;SHO30(改良HTK灌注组n=6例):心脏放血停跳后热缺血30min,灌注改良HTK液1000ml(含血栓素酶抑制剂10mmg肝素5mg),切取供心,置于4℃改良HTK液中保存2h,心脏复跳前灌注500ml去白细胞血(含血栓素合成酶抑制剂5mg+肝素3mg)。各组均以双腔静脉原位心脏移植方法行原位移植,监测供体心脏移植前后的血流动力学指标,测定心肌酶、肌钙蛋白I、ATP、TXB2、SOD、MDA、心肌细胞凋亡、Bcl-2, Bax, Caspase-3基因蛋白水平的表达情况等指标,电镜观察心肌组织超微结构改变。 统计学方法:比较两组之间的差异采用student t检验,多组间的差异比较采用方差分析。 结果:SH30、SHO30组各项检测指标均优于S30组(P0.05)。SH30、SHO30组间血流动力学与S0组无差别(P0.05),但其余生化指标较S0组差(P0.05)。SH30、SHO30组间血流动力学无明显差异(P0.05), SHO30在心肌酶学、cTn I、TXB2、ATP、SOD、MDA指标优于SH30组(P0.05),而心肌细胞凋亡、Bax、Caspase-3基因蛋白水平的表达高于SH30组,Bcl-2基因蛋白的表达低于SH30组。心肌超微机构提示S0、SHO30组未发现血栓,而在S30组有大量血栓,SH30组也在冷保存后发现微循环血栓。从心肌结构、线粒体及微血管内皮细胞变化来看,S0组最完整,SHO30次之,S30组最差。 结论: 1、改良HTK液灌注可以减轻热缺血30分钟猪NHBD心脏缺血再灌注损伤。 2、血栓素合成酶抑制剂与肝素联合应用可以改善热缺血30分钟猪NHBD供心心肌微循环,增强对猪NHBD供心的保护作用。 3、血栓素合成酶抑制剂可以减轻心肌缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡。


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