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产超广谱β-内酰胺酶菌中整合子耐药机制的研究

陈体  
【摘要】:目的 研究产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子的分布,探讨整合子介导的耐药机制在产ESBLs菌耐药性中的作用。采用反向PCR对Ⅰ类整合子的侧翼序列进行分析,为Ⅰ类整合子调控基因分析及克隆奠定研究基础。 方法 收集中南大学湘雅三医院2009年6月至2009年12月产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌100株。根据各型整合酶和整合子已知基因序列设计引物,采用PCR对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因及blaTEV、blaSHV和blaCTX-M基因进行检测;PCR扩增整合子可变区,限制性片段长度多态性分析(RFLP)鉴定整合子可变区的同一性;PCR产物测序分析整合子所携带的基因盒种类。用HindⅢ限制性内切酶对基因组DNA酶切后反向PCR扩增Ⅰ类整合酶基因的侧翼序列。 结果 产ESBLs菌株中Ⅰ类整合子阳性率为69%,整合子阳性的产ESBLs菌株对包括头孢菌素类、喹诺酮类、磺胺类和β-内酰胺/酶抑制剂类在内的12种抗菌药物的耐药率高于整合子阴性产ESBLs菌株,χ2检验差异性有统计学意义,P0.05;Ⅰ类整合子在blaSHV、blaTEM和blaCTX-M基因阳性菌株中检出率分别为84.4%、72.9%和68.9%。无Ⅱ、Ⅲ类整合子检出。反向PCR扩增出1800bp大小的Ⅰ类整合酶基因侧翼序列片段。 结论 在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,Ⅰ类整合子携带与产ESBLs菌株耐药相关,Ⅰ类整合子对细菌多重耐药的产生和传播起着重要作用,应加强临床细菌基因水平的耐药监测,采取有效措施防止耐药性的广泛传播。


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