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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性检测和同源性分析

弓艳娥  
【摘要】:目的:通过了解长治医学院附属和平医院(以下简称“和平医院”)近三年(2007-2009)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的检出率、耐药率的变化及临床分布情况,提高临床对院内感染MRSA菌株的认识,为临床科学合理的选用抗菌药物提供实验依据;通过对收集菌株进行同源性分析,为控制耐药菌株的感染和暴发流行提供实验依据。 方法:(1)收集和平医院2007年1月至2009年12月份检验科微生物室收检各种临床标本中检出的金黄色葡萄球菌菌株(同一患者多次分离到的菌株仅分析第一次细菌),回顾性分析其临床资料,用K-B法检测金黄色葡萄球菌对青霉素(P)、克林霉素(DA)、红霉素(E)、氯霉素(C)、阿奇霉素(AZM)、庆大霉素(CN)、环丙沙星(CIP)、左旋氧氟沙星(LEV)、替考拉宁(TEC)、复方磺胺甲恶唑(SXT)、呋喃妥因(F)、氨苄西林/舒巴坦(SAM)、哌拉西林/他唑巴坦(TZP)、亚胺培南(IMP)、头孢吡肟(FEP)15种药物的药敏情况。用头孢西丁纸片法筛选MRSA,对筛选所得MRSA菌株用E-test试条测其对万古霉素的MIC值。(2)对初筛试验所得到的MRSA菌株进行mecA基因扩增,用以确证MRSA.(3)对确证的MRSA菌株分别进行SCCmec分型、Spa分型及ERIC-PCR同源性分析。 结果:(1)回顾性分析结果:2007年至2009年分别检出金黄色葡萄球菌34株、97株、103株,其中MRSA菌株分别为2株、41株30株,MRSA的检出率为5.88%、42.27%、29.13%;其中痰标本的检出率最高,占87.6%,其次是胸水、分泌物各占2.7%,其它占7%;2007年仅检出两株MRSA,分布在肾内科和神经外科,2008年和2009年在院里其它科室相继检出MRSA菌株,以神经外科的检出率最高,占31.5%,其次是呼吸内科,检出率占17.8%;MRSA对青霉素、红霉素、克林霉素、庆大霉素、环丙沙星、左旋氧氟沙星、亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟的耐药率3年中几乎均90.0%;对呋哺妥因、复方新诺明的耐药率也在上升;在3年中和平医院未发现耐万古霉素的MRSA,所有MRSA菌株对万古霉素的MIC值在0.5~2μg/ml范围。(2)mecA基因检测结果:头孢西丁纸片法筛选所得73株MRSA菌株,经PCR法检测mecA基因,全部出现310bp的mecA基因条带,与阳性对照菌株ATCC43300扩增结果一致。本次实验所检测73株MRSA菌株头孢西丁纸片的抑菌圈直径范围为6mm~9 mm,初筛试验和确证试验符合率为100%。(3)多重PCR SCCmec基因扩增结果:所检测的73株MRSA的SCCmec的多重PCR扩增分型结果全部出现147bp的mecA基因条带,其中71株同时出现280bp条带,为SCCmecⅢ型的MRSA,2株除147 bp的mecA基因条带外,未扩增出其他条带,为不能分型菌株。(4)Spa分型结果:73株MRSA的Spa型别为t03072株(2007年2株,2008年41株,2009年29株),t3041株(2009年11月检出),分别占98.6%、1.4%。(5)ERIC-PCR分型结果73株MRSA菌株ERIC-PCR凝胶成像呈6种指纹条带,其中A型66株,A'型1株;B型2株;C型2株;D型1株;E型1株。应用GENETOOLS图谱分析软件分析,A与A'相似度值为88.9%,大于80%,为同一亚型,代表同一克隆株,故可分为A、B、C、D、E共5型。(6)三年中神经外科检出23株MRSA菌株均为SCCmecⅢ-t030,A型,是同一克隆株在科室内的传播,且在2008年8月份出现一次小的暴发感染。 结论:(1)和平医院检出MRSA主要分布在外科病房,其中神经外科出现一次小规模的暴发感染,经同源性分析,检出菌为SCCmecⅢ-t030,ERIC.PCR分型为A型的同一克隆株;MRSA菌株耐药率较高,但还未出现耐万古霉素金黄色葡萄球菌,其对万古霉素的MIC值处在0.5~2μg/ml范围内。(2)和平医院分离的MRSA菌株多数为SCCmecⅢ-t030,ERIC-PCR分型为A型,仅在2009分离出一株SCCmecⅢ-t304,ERIC-PCR分型为E型菌株。


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