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口腔黏膜下纤维性变病例蛋白质组学研究

贺智晶  
【摘要】:口腔黏膜下纤维性变(oral submucous fibrosis, OSF)是一种慢性的、复杂的口腔黏膜疾病。主要表现为上皮下组织的炎症反应和黏膜下组织的进行性纤维化。咀嚼槟榔是OSF的主要致病因素。OSF是一种口腔的癌前病变。OSF的癌变率高达7%-13%。OSF的发病及癌变机制也已成国内外学者共同关注的焦点。本课题组的胡延佳用AffymetrixU133A2.0芯片构建OSF颊黏膜组织的基因表达谱,并对部分差异表达基因进行了验证。然而,仅在基因组水平研究OSF发生发展过程中DNA或是mRNA的变化不能完全阐明OSF发病过程中的分子机制。为了寻找新的OSF发病分子标记物,本研究采用蛋白质组学方法对正常人和OSF患者的口腔颊黏膜组织中差异表达的蛋白质进行分离和鉴定,对鉴定出来的差异蛋白质进行生物信息学分析,并采用Western blotting和免疫组织化学的方法对部分差异蛋白质进行半定量和定性验证。 (一)蛋白质组学筛选口腔黏膜下纤维性变病例差异蛋白质 目的:准确筛选正常人和OSF患者口腔颊黏膜组织的差异表达蛋白质,并对其进行生物信息学分析。 方法:收集正常人(NBM组)和OSF患者(OSF组)的口腔颊黏膜组织标本各10例,分组混合,形成1对标本。对其进行二维电泳分离(2-DE),经图像分析后找出差异表达的蛋白质斑点,并进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MADLDI-TOF-MS)分析鉴定,并对质谱鉴定出的蛋白质进行生物信息学分析。 结果:得到的NBM组和OSF组的2-DE图谱,经过软件分析得到表达差异在2倍以上的蛋白质斑点48个。采用MADLDI-TOF-MS对差异蛋白质斑点进行鉴定,最终得到33个差异蛋白质。其中,在OSF组中表达上调的有22个,表达下调的有11个。 结论:比较蛋白质组学技术能有效地鉴定OSF差异表达蛋白质,能为寻找OSF发病分子标记物的提供参考数据。 (二)部分口腔黏膜下纤维性变病例差异蛋白质的验证研究 目的:对前期鉴定的5个差异蛋白质进行半定量和定性验证研究并探讨其临床意义。 方法:收集NBM组和OSF组颊黏膜组织标本,用于Western blotting分析的标本各20例,用于免疫组织化学分析的标本NBM组20例,OSF组60例。使用Western blotting和免疫组织化学的方法对5个差异蛋白质(prohibitin、peroxiredonxin2、translationally controlled tumor proteinn calumenin及cellular retinoic acid binding protein1)在NBM组和OSF组中的表达进行检测。 结果:Western blotting结果显示OSF组中的prohibitin、 peroxiredonxin2及translationally controlled tumor protein的表达明显上调,calumenin及cellular retinoic acid-binding protein1的表达明显下调。免疫组织化学结果显示OSF组中prohibiting peroxiredonxin2及translationally controlled tumor protein的阳性表达率分别为70.0%、71.7%、81.7%,明显高于NBM组,calumenin及cellular retinoic acid binding protein1在OSF组的阳性表达率分别为8.3%、0%,明显低于NBM组。 结论:5个差异蛋白质的Western blotting和免疫组织化学结果与前期蛋白质组学结果相一致。3个上调蛋白质和2个下调蛋白质的差异表达能够有助于解释OSF发病过程中某些病理生理学改变,有望成为潜在的OSF发病的分子标志物。


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