收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

常见嗜尸性麻蝇分子标记的检测及地区基因库的建立

郭亚东  
【摘要】:前言: 死亡时间(the postmortem interval, PMI)推断一直是法医侦破刑事案件的重点和难点,近年来,利用嗜尸性昆虫为刑事案件侦破提供线索的案例越来越多,其独特的优越性备受法医工作者的关注。麻蝇科很多种类的麻蝇都有应用于PMI推断的潜在价值。嗜尸性麻蝇准确、快速的种类鉴定是利用其进行PMI推断的关键步骤,然而至今许多嗜尸性麻蝇的幼虫仍没有系统的形态学鉴定要点,甚至一些雌性成虫(麻蝇属)仍然难以区分。因而,麻蝇在法医学实践中的应用受到严重制约。简便、快捷、有效的麻蝇种类鉴定方法是法医昆虫学亟待解决的一个难题。近年来,分子生物学技术的发展为嗜尸性麻蝇种类鉴定带来了曙光,大量研究证实线粒体DNA(mtDNA)分子标记可以用来进行嗜尸性麻蝇的种类鉴定。分子鉴定得以推广的前提条件是大量基因数据的存在。中国地域广阔,气候和地理环境复杂多变,麻蝇种类十分丰富,但尚无嗜尸性麻蝇的基因数据,这对法医昆虫学在国内的发展不利,也使全球嗜尸性麻蝇分子特性对比研究受到严重制约。因此,利用分子生物学技术研究不同基因片段对嗜尸性麻蝇的鉴定效力,寻找嗜尸性麻蝇的分子标记,建立我国嗜尸性麻蝇基因库十分必要。 目的: 1.收集嗜尸性麻蝇样本,对我国嗜尸性麻蝇常见种类、分布及嗜尸特性进行初步调查; 2.改良、优化嗜尸性麻蝇DNA提取方法,研究不同基因片段对嗜尸性麻蝇的鉴定效力,尝试联合分析等分子鉴定方法,筛选出易于推广的嗜尸性麻蝇分子标记,初步建立我国嗜尸性麻蝇的基因库; 3.尝试在实际案例中应用嗜尸性麻蝇对PMI进行推断,把分子鉴定运用到实践工作中。 方法: 1.根据不同地理纬度为划分依据,在全国范围内选取代表性区域,每年定期应用兔子、狗、猪等动物尸体诱捕各类嗜尸性麻蝇。按照形态学特征对样本进行初步分类、统计及编号。 2.改良目前常用DNA提取方法,实现用少量组织获取足量的高品质DNA。探索目前国际上常用的引物序列,并根据蝇类mtDNA的COI、COⅡ、16SrDNA、ND1、Cytb等序列运用primer5软件设计引物序列。使用PCR试剂盒进行扩增,常规琼脂糖凝胶电泳检测DNA及PCR产物,扩增产物用胶回收试剂盒纯化,纯化产物批量测序。序列检测结果用Chromas v1.43、ClustalW等软件显示并截取等长度片段,再运用Mega v4.0软件进行聚类分析,根据结果筛选分子标记。将采集于我国不同地理、气候条件代表性地域的嗜尸性麻蝇基因数据上传GenBank,构建完善我国嗜尸性麻蝇基因库。 3.在实际案例中,应用前期筛选出的分子标记鉴定嗜尸性麻蝇,根据已有发育资料尝试PMI的推断,探索嗜尸性麻蝇作为法庭证据的程序和方法。 结果: 1.2009-2011年对我国18省29个地区进行了麻蝇诱捕,共捕获包括棕尾别麻蝇(Boerttcherisca peregrine)、黑尾黑麻蝇(Helicophagella melanura)、白头亚麻蝇(Paras arc ophaga albiceps)、酱亚麻蝇(Parasarcophaga dux)、华南球麻蝇(Phallosphaera gravely)等麻蝇样本,进行初步形态学鉴定后筛选出272个样本,进行编号。 2.改良后的SDS-PK法抽提效力较高,从麻蝇胸肌、头部、腿部、翅膀均可成功提取DNA。应用272-bp和278-bp的C0Ⅰ片段、289bp和555-bp的16Sr RNA片段、189-bp和637-bp的COⅡ片段用来区别常见嗜尸性麻蝇时,种间分化岐数一般都大于5%,个别种间甚至超过10%,但对于同一属不同种的种间分化岐数有时小5%;种内分化岐数一般都小于3%,很多个体种内差异为0。ND1及Cytb序列应用于麻蝇种类鉴定时效果较差。使用短片联合分析时,种间进化岐数和种内进化岐数明显更为合理,准确性较高。 3.实践中应用分子标记进行种类鉴定是可行的,应用嗜尸性麻蝇对案件进行PMI推断的准确性要高于传统方法,但受较多因素影响,稳定性稍差。 结论: 1.通过大量动物演替实验,在我国部分地区进行嗜尸性麻蝇样本的采集,补充了嗜尸性麻蝇种类和分布资料。 2.经过改良后的DNA提取方法,应用较少的组织(如单附足)既可获得足够量的DNA。短片段的(200-600bp)16Sr RNA、CO Ⅰ、COⅡ分子标记具有简便、快速、经济等优点,多片段联合运用可确保种类鉴定的准确性。 3.GenBank中大量具有地域性代表性基因序列的上传,初步完成了我国嗜尸性麻蝇基因库的建立,为国外学者了解中国嗜尸性麻蝇分子特性开启一扇窗。 4.在嗜尸性麻蝇基因库建立的基础上,实际案例中应用分子标记可以迅速、准确的完成麻蝇种类鉴定,进而解决PMI推断等法医学问题,促使法医昆虫学理论上升到实践高度。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 梁铬球;樊武疆;林厚炳;贾凤龙;;广州口岸截获一种麻蝇:砖形弯刀麻蝇(双翅目:麻蝇科)[J];中国媒介生物学及控制杂志;2007年02期
2 张连富,刘杰;辽宁省西部折麻蝇属一新种(双翅目:麻蝇科)[J];中国媒介生物学及控制杂志;1997年06期
3 邓耀华;陈之梓;范滋德;;从入境飞机上截获的努比亚污蝇Wohlfahrtia nuba的重描述(双翅目:麻蝇科)(英文)[J];寄生虫与医学昆虫学报;2006年02期
4 张韶华,梁焯南,张秀梅,梁铬球,贾凤龙,陈振耀,谢委才,冯南贵;深圳市蝇类调查[J];医学动物防制;2002年07期
5 蒿自睿;王江峰;万香波;陈玉川;;我国嗜尸性蝇类分布的相关文献综述[J];寄生虫与医学昆虫学报;2006年04期
6 王涛,李芳;耳道蝇蛆病二例报告[J];吉林大学学报(医学版);1986年04期
7 王存友;利用法医昆虫学破案1例[J];刑事技术;2003年05期
8 王江峰,尹晓宏,陈强胜,陈玉川,竞花兰;北美、欧洲法医昆虫学学术会议综述[J];法律与医学杂志;2004年04期
9 梁铬球;贾凤龙;赵爽;郭泽平;林厚炳;郑振武;;广州口岸截获输入性蝇类——银口羽麻蝇(双翅目:麻蝇科)[J];中国媒介生物学及控制杂志;2006年03期
10 胡丙杰,黄瑞亭,陈玉川,祝家镇;法医昆虫学的发展与主要成就[J];法医学杂志;1998年02期
11 师鉴;王苏梅;张国立;赵勇;常梅;刘继敏;曹秀芬;赵宝刚;;河北省麻蝇科种属及其分布[J];医学动物防制;2005年11期
12 彭家法,夏元飞;法医昆虫学在检案中的应用3例[J];刑事技术;2000年05期
13 彭家法,夏元飞;法医昆虫学在3例检案中的应用[J];法医学杂志;1999年02期
14 朱光辉,叶恭银,胡萃;第21届国际昆虫学大会上法医昆虫学论文简介[J];中国法医学杂志;2001年02期
15 李凯,叶恭银,胡萃;第22届国际昆虫学大会法医昆虫学论文简介[J];中国法医学杂志;2005年02期
16 吕春荣;叶绍辉;李林凤;张艳艳;顾恩妍;关伟军;马月辉;;表皮干细胞的鉴定方法[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年43期
17 王厚伟;窦彦玲;田景振;李峰;王振国;;基于全电性离子色谱的6味中药药性的蛋白质分子标记研究[J];世界科学技术-中医药现代化;2008年06期
18 何大健;吴长清;杨世华;;乳腺癌肿瘤干细胞的研究进展[J];生物技术通报;2011年09期
19 杜勇;严缘昌;李逸平;;精原干细胞及其研究进展[J];生殖与避孕;2011年08期
20 张孟余,吴新生;陈氏污蝇幼虫形态描述(双翅目:麻蝇科)[J];中国媒介生物学及控制杂志;1990年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 秦智伟;王丽莉;李莹;张艳菊;周秀艳;武涛;;黄瓜细菌性角斑病抗性遗传规律与分子标记研究[A];全国植物分子育种研讨会摘要集[C];2009年
2 耿拓宇;陈宽维;张学余;赵冬伟;周怀军;李慧芳;陈国宏;吴信生;;乌鸡黑色性状分子标记的探索[A];第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2001年
3 张志明;赵茂俊;潘光堂;;玉米高密度SSR分子连锁图谱的构建[A];2004全国玉米种质扩增、改良、创新与分子育种学术会议论文集[C];2004年
4 杜金璞;黄冲;刘帆;潘娟娟;骆勇;马占鸿;;小麦条锈菌水源11致病类群的AFLP标记[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
5 李小孟;谢让金;鲁振华;周志钦;;基于AFLP标记、叶绿体和细胞核ITS序列的柑橘属植物系统进化框架[A];庆祝中国园艺学会创建80周年暨第11次全国会员代表大会论文摘要集[C];2009年
6 姜振;袁燕萍;魏广卫;徐世清;司马杨虎;;家蚕RAPD-SSR-AFLP三种分子标记综合连锁图谱的整合[A];中国蚕学会第八届暨国家蚕桑产业技术体系家(柞)蚕遗传育种及良种繁育学术研讨会论文集[C];2011年
7 崔世友;;大豆分子标记研究的现状及展望——Ⅰ 遗传图谱的构建[A];’2003中国作物学会学术年会文集[C];2003年
8 陈红;秦瑞珍;;一种新的鉴定水稻初级三体的方法[A];作物科学研究理论与实践——'2000作物科学学术研讨会文集[C];2001年
9 曹必好;王勇;雷建军;陈国菊;;茄子抗青枯病遗传规律及分子标记筛选研究[A];2008园艺学进展(第八辑)——中国园艺学会第八届青年学术讨论会暨现代园艺论坛论文集[C];2008年
10 张博;黄敏仁;王明庥;;林木遗传图谱构建研究现状及展望[A];持续发展,再创辉煌——中国林学会林木遗传育种分会第五届年会文集[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郭亚东;常见嗜尸性麻蝇分子标记的检测及地区基因库的建立[D];中南大学;2012年
2 JIXIANG WU;[D];浙江大学;2001年
3 陆光远;甘蓝型油菜显性细胞核雄性不育基因和抑制基因的分子标记及其应用[D];华中农业大学;2004年
4 邢亚娟;中国山杨与美洲山杨杂交种新品系选育研究[D];东北林业大学;2005年
5 王忠卫;遗传标记在鱼类育种和生态研究中的应用[D];中国科学院研究生院(水生生物研究所);2005年
6 孙晓丽;小麦抗白粉病基因的分子标记及白粉菌引发的细胞程序性死亡的相关研究[D];中国农业科学院;2006年
7 杨龙;利用cDNA/EST序列大规模开发内含子多态性标记的研究[D];浙江大学;2008年
8 朱速松;栽培水稻杂种不育新基因的定位[D];南京农业大学;2005年
9 刘云国;三种重要海水养殖鱼类的分子遗传学研究[D];中国海洋大学;2005年
10 孟昭东;玉米结实习性遗传规律及其在育种中的应用[D];山东农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈卫华;麻蝇全蛋白提取及凝集素的纯化鉴定[D];江西师范大学;2010年
2 陈瑞庆;福建橄榄(Canarium album)遗传多态性上的研究[D];福建农林大学;2005年
3 刘成;梨抗黑星病基因的AFLP分子标记[D];中国农业大学;2005年
4 韩永亮;同源四倍体高粱与约翰逊草SSR分析及杂种优势多代利用研究[D];河北农业大学;2006年
5 董育红;甘蓝型油菜白花基因的分子标记及辅助育种研究[D];西北农林科技大学;2005年
6 郭海江;抗病无核葡萄新种质创制及分子标记辅助育种[D];西北农林科技大学;2005年
7 余青青;人工合成白花甘蓝型油菜抗根肿病特性遗传研究[D];四川农业大学;2008年
8 何静;木薯主栽品种/品系农艺性状与分子标记的关联分析[D];海南大学;2010年
9 童海军;分子标记杂交水稻种子生产的技术研究[D];浙江大学;2001年
10 国艳梅;黄瓜苦味遗传规律研究及AFLP分子标记[D];东北农业大学;2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 朱改芹;棉花显性无基因分子标记获得国家发明专利[N];农民日报;2009年
2 平文;天津利用分子标记优化葡萄纯度[N];农民日报;2005年
3 ;农作物分子标记进展快[N];科技日报;2002年
4 崔光红 黄璐琦;中药材真伪鉴别新方法[N];中国中医药报;2007年
5 珍珍;我国将建立分子标记开发技术体系[N];东方城乡报;2008年
6 韩德;我植物分子育种研究获突破[N];中国知识产权报;2010年
7 记者 陈茂梁 通讯员 余宁宁;肿瘤侵袭转移会露出“马脚”[N];健康报;2001年
8 陈茂梁 余宁宁;浙医二院解决脑癌治疗难题[N];中国医药报;2001年
9 见习记者 卢育辉;一次可测蔬菜60种农药[N];广东科技报;2006年
10 李大庆 实习生 李绍富;农作物育种向虚拟分子设计迈步[N];科技日报;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978