HPLC和垂直板非连续SDS-PAGE检测尿中微量蛋白方法的建立与评价

【摘要】：目的： 1.建立一种快速检测尿中微量白蛋白的高效液相色谱检测方法。 2.研究垂直板非连续SDS-PAGE分析尿蛋白的临床应用价值。 方法： 1.高效液相色谱法：采用新的流动相建立分子筛-高效液相色谱法,测定人血清白蛋白标准液和尿液白蛋白,对该法进行方法学评价并分析56例糖尿病患者的尿液标本。 2.垂直板非连续SDS-PAGE:用垂直板非连续SDS-PAGE分析150例患者(糖尿病患者90例,其他疾病患者60例)尿蛋白,并和尿蛋白半定量及尿蛋白(24小时U-Pr)、尿微量白蛋白(MA)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β2-微球蛋白(β2-MG)结果进行分析比较。 结果： 1.高效液相色谱法：在流速为1.0ml/min,检测波长205nm时,白蛋白的出峰时间1.7min。标准曲线方程为Y=1.1872X+21.286,相关系数R2=0.9984。线性范围为(2.5～2000)mg/L,线性回归方程为：Y=1.191X+21.134,相关系数R2=0.9969。检测低限为2mg/L。批内CV分别为3.98%(20mg/L)、3.55%(200mg/L)、4.65%(2000mg/L),批间CV分别为4.05%(20mg/L)、3.60%(200mg/L)、4.74%(2000mg/L)。回收率分别为95.3%(100mg/L)、98.1%(500mg/L)、97.2%(1500mg/L)。4g/L维生素C、40g/L尿素、4g/L,肌酐、40g/L葡萄糖、20g/L氯化钠、100U/ml青霉素钠对高效液相色谱法无干扰。Hb、胆红素、IgG有干扰,干扰率分别为Hb：68.2%(143.75mg/L)、77.5%(287.50mg/L)、92.1%(575.00mg/L)；胆红素：12.9%(31.25mg/L)、16.8%(62.50mg/L)、20.1%(125.0mg/L)；IgG：2.16%(100mg/L)、14.7%(150mg/L)、18.5%(200mg/L)。 2.垂直板非连续SDS-PAGE:根据电泳图谱可以分为生理性、肾小管性、肾小球性及混合性蛋白尿；与U-Pr、MA、NAG、β2-MG相比,SDS-PAGE的灵敏度相对较高。 结论： 1.本研究建立了一种快速检测尿中微量白蛋白的高效液相色谱检测方法。该法检测快速,灵敏度高,能检出更多的微量白蛋白。 2.本研究探讨了垂直板非连续SDS-PAGE分析尿蛋白的临床应用价值。此法检测相对快速,敏感性好,诊断符合率高,不仅可以了解肾脏损伤部位和程度,而且对诊断早期肾损伤有较大的应用价值。