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体外Ponatinib耐药细胞模型建立及耐药机制研究

于倩  
【摘要】:慢性粒细胞白血病(Chronic myeloid leukemia, CML)是一种起源于造血干细胞恶性克隆性疾病,费城染色体(Ph)是其特征的细胞遗传学标志,其衍生的BCR-ABL融合基因编码210KD融合蛋白,后者可通过持续激活的酪氨酸激酶活化下游多条信号转导通路,促进白血病细胞增殖和凋亡耐受,从而导致慢粒的发生发展。因此,BCR-ABL酪氨酸激酶成为治疗慢粒最理想的分子靶点。伊马替尼(Imatinib)作为首个被批准用于肿瘤治疗的靶向性药物,因其治疗的安全性及有效性成为慢粒患者的一线药物。然而,仍有部分患者存在原发或是获得性耐药,其中BCR-ABL激酶结构域点突变是获得性耐药的主要原因。随后发展设计的第二代新药,尼洛替尼(Nilotinib)和达沙替尼(Dasatinib)是用于治疗Imatinib耐药或是不能耐受的慢粒患者,可抑制除T315I突变以外其它大多数的BCR-ABL激酶结构域突变所致的酪氨酸激酶活性。 Ponatinib作为治疗慢粒的第三代酪氨酸激酶抑制剂,是Ariad制药公司开发的一种可以抑制包括T315I在内的所有BCR-ABL激酶结构域突变的药物,由BCR-ABL酪氨酸激酶结构域点突变引起的Ponatinib耐药已有相关实验研究报导。目前该药已经进入Ⅱ期临床试验,该实验招募的94%CML耐药患者均为至少2种获准的酪氨酸激酶抑制剂治疗失败后,虽然经过Poantinib治疗一半的患者达到了主要细胞遗传学缓解,但仍有部分患者出现了耐药。 针对这一现象,本研究建立了体外Ponatinib耐药模型,并揭示其可能的耐药分子机制,为进一步筛选和开发新的酪氨酸激酶抑制剂,逆转Ponatinib耐药提供实验依据。 本研究使用32D (BCR-ABL)和K562两种BCR-ABL+CML细胞株,通过逐步递增Ponatinib浓度的方法建立耐药细胞株模型。以敏感细胞株为对照,PCR测序未发现其BCR-ABL激酶结构域存在点突变。用伊马替尼,尼洛替尼和达沙替尼分别处理耐药及敏感细胞株,MTS实验检测细胞增殖活性证实Ponatinib耐药的32D (BCR-ABL) ponR和K562ponR细胞,同时也存在对伊马替尼,尼洛替尼和达沙替尼耐药。Westem blot检测发现较低浓度Poantinib即可抑制耐药细胞磷酸化BCR-ABL蛋白表达。以上结果均提示耐药细胞呈现出一种非BCR-ABL酪氨酸激酶依赖的耐药分子机制。 对32D (BCR-ABL) ponR细胞进一步研究发现,在BCR-ABL活性受到抑制时,其下游底物STAT5仍保持活性。以小分子抑制剂为基础的合成性致死筛选试验结果显示只有某些JAK家族的抑制剂协同Ponatinib才会对32D (BCR-ABL) ponR耐药细胞产生合成性致死作用。shRNA敲除32D (BCR-ABL) ponR耐药细胞BCR-ABL基因模拟Ponatinib药理作用,MTS实验显示,单一JAK家族的抑制剂即可抑制耐药细胞的增殖,说明该细胞耐药与活化的JAK/STAT辅助信号转导通路有关。基因芯片技术分析耐药及敏感细胞基因表达情况,并用实时荧光定量PCR对其进行验证,发现耐药细胞中细胞因子IL-3表达明显上调(P0.01),且IL-3中和抗体可以减弱耐药细胞对Ponatinib的耐受。而K562ponR细胞也同样存在着辅助信号转导通路MEK/ERK的活化,联合使用Ponatinib和MEK/ERK抑制剂可以抑制K562ponR细胞的生长。 我们也分析了1例经Ponatinib治疗失败的患者标本,该患者存在BCR-ABLT315I突变,但BCR-ABLT315I活性在体外可被低浓度Ponatinib抑制,合成性致死筛选试验siRNA实验发现,敲除CSF1R可协同Ponatinib显著降低白血病细胞的生长,提示其可能是通过激活CSF1R辅助信号转导通路产生的耐药。 通过这些研究说明Ponatinib耐药呈现一种非BCR-ABL依赖的耐药分子机制,针对这类患者同时采取抑制BCR-ABL及辅助信号通路抑制剂可以达到理想的治疗效果。


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1 王少东,莫简,王多宁,樊代明;耐药细胞中超氧化物歧化酶活性的变化及其对细胞耐药性的影响[J];细胞与分子免疫学杂志;1998年03期
2 陈燕,李惠玉,吴裕丹;骨髓增殖性疾病Bcr/Abl融合基因的表达及其意义(英文)[J];现代临床医学生物工程学杂志;1999年02期
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17 黄玫;;ABL在药理教学中的研究与实践[J];长春医学;2006年04期
18 张文卿;拓扑异构酶Ⅱ和肿瘤多药耐药[J];中国肿瘤临床;1996年03期
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2 何一心;傅磊;林卓坤;宗建超;蔡英林;刘福森;杨纯正;栾凤君;宋增璇;;反义mdr-1寡核苷酸对耐药细胞的抑制作用[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
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9 杨颖;胡炯;张嘉敏;王玲玲;朱自严;;细胞因子、植入物及BCR-ABL融合基因定量多维监测在造血干细胞移植后的免疫监控中的作用[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集(摘要篇)[C];2010年
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1 于倩;体外Ponatinib耐药细胞模型建立及耐药机制研究[D];中南大学;2013年
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1 胡敏;Ph染色体阳性白血病ABL激酶区基因多态性研究[D];泸州医学院;2012年
2 尹虹;慢性粒细胞白血病中BCR-ABL调控Survivin机制的初步研究[D];南方医科大学;2013年
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