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TGF-β1、iNOS在鸡FDM的表达及作用

朱玉广  
【摘要】: 目的:本研究通过建立鸡的形觉剥夺性近视眼(Form-deprivation myopia,FDM)动物模型,研究视网膜和脉络膜中转化生长因子β1(Transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)蛋白质及其mRNA在FDM形成中的变化,探讨TGF-β1和iNOS在近视发病中的作用及其相互调控作用。 方法:选择出生一天的白色来亨鸡60只作为实验动物,采用形觉剥夺方法,随机遮盖来亨鸡一只眼,另一只眼作为对照,建立鸡的FDM动物模型。实验眼分为A、B两组,非遮盖眼作为对照组,其中实验A组来亨鸡眼持续遮盖3周,实验B组来亨鸡眼持续遮盖2周后去遮盖1周。分别于实验前、实验1周、2周、3周,行视网膜检影,检测双眼屈光度,眼科A超测量双眼的眼轴长度。分别于实验2、3周时处死实验动物并取材,采用NO酶法试剂盒测定实验眼和对照眼的视网膜和脉络膜NO的含量;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测视网膜和脉络膜组织TGF-β1和iNOS mRNA的表达;免疫组织化学方法(采用SABC改良方法)检测视网膜和脉络膜TGF-β1和iNOS蛋白质的表达。光学显微镜下测量实验眼和对照眼巩膜软骨层的厚度及双核细胞数,计算巩膜软骨层的相对厚度及双核细胞的百分数。 结果:形觉剥夺使来亨鸡实验眼眼轴增长,近视屈光度增加,去遮盖后双眼眼轴长度差异减小,近视屈光度下降。在去遮盖1周时,眼轴长度和眼屈光度未恢复到对照组水平,鸡眼呈低度近视状态。在鸡视网膜和脉络膜组织有TGF-β1和iNOS蛋白质及其mRNA的表达,TGF-β1和iNOS的阳性染色主要分布于视网膜光感受器的外节,并且位于光感受器外节的不同位置,而在RPE及脉络膜无明显的阳性染色。在FDM发展中,形觉剥夺降低实验眼视网膜和脉络膜的NO含量,减弱实验眼视网膜和脉络膜TGF-β1和iNOS的阳性染色,使实验眼视网膜和脉络膜TGF-β1和iNOS mRNA的表达下调;去遮盖1周后, NO含量、TGF-DI和 iNOS的卜性染色及”l*。-p i JI卜八八的农达,阶共判 对照组水平jOS祁NA的表达逐渐恢复,在去遮盖后1周,川OS 11叫A 的表达高于对照组水平。形觉剥夺使巩膜软骨层的相对厚度增加,双 核软骨细胞百分数增加,实验眼软骨层和纤维层边界欠清,去遮盖后 恢复正常。统计学分析具有显著性差异吓狈.05人 结论:形觉剥夺可以建立鸡的近视眼动物模型。视网膜TGF-61 和iNOS可能参与调控FDM的形成,视网膜TGF-el和iNOS表达水乎 下降与mM的形成有关。在叩M发展中,TGF-pl和 iNOS的表达是 平行的,m卜pl和州OS之间可能有相互作用,也可能受其它因子 的调控。形觉剥夺导致巩膜软骨细胞的增殖活性和细胞外基质 (Extracellular matrix,EC51)形成增 力,弓起巩膜的主动重塑。去遮 盖后近视屈光度下降,眼轴增加减‘慢或停止,玩明术成热动物的l‘l川 具有可逆性。


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