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尖锐湿疣发病机制的研究

谢红付  
【摘要】: 尖锐湿疣(Condyloma acuminata,CA)作为一种常见的性传播疾病,其发病原因已经明确,是由人乳头瘤病毒(HPV)感染所致的皮肤粘膜的良性增生。但其具体的发病机制仍不十分清楚,目前已有许多文献认为患者全身或局部免疫功能失衡在CA发病中起着重要的作用,因此,本研究将进一步探讨CA患者血清IL-10及IFN-γ水平的变化及患者外周血单个核细胞(PBMC)凋亡的变化;另一方面,CA是一种良性增生性病变,其细胞凋亡、端粒酶活性及蛋白构成很可能存在异常。因此,为了探讨上述问题,我们从不同的角度对其进行了研究:(1)CA皮损中细胞凋亡及端粒酶活性;(2)免疫调节剂卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)治疗CA后对患者血清IL-10及IFN-γ水平的影响;(3)BCG-PSN治疗CA后对患者PBMC凋亡的影响;(4)CA皮损总蛋白质双向凝胶电泳分析。 第一章:CA皮损中端粒酶活性及细胞凋亡 方法:随机选取60例CA患者,采用端粒重复序列扩增一酶标法(TRAP—ELISA)检测患者皮损中端粒酶活性,并与正常包皮组织做比较;原位末端标记法(TUNEL)检测皮损中凋亡细胞;免疫组化法检测患者皮损中凋亡相关分子Fas、FasL、TRAIL的表达水平。 结果:(1)60例CA患者中有54例(90%)CA皮损中端粒酶活性为阳性,A_(450)值为0.501~2.760,明显高于正常包皮组织(仅1例为阳性,A_(450)值为0.007~0.375),两者有显著性差异(P<0.01);48例(80 博卜学位论上 中义摘要 %)皮损中凋亡细胞阳性,正常组织中凋亡细胞均为阴性;且在CA 患者中端粒酶活性与凋亡指数呈显著负相关(,4.515,P二 0刀04人 (2)所有 CA皮损中(1000)Fas均为阳性,46例(76.7%)FasL 阳性,42例(70%)TMIL卜性,正常表皮基本不表达 Fas、FasL、 TRAIL。且FasL和 TRAIL分子表达程度与皮损区真皮层单个核细胞 浸润呈显著负相关 /一0.506和r—0.450,P<0*5)。 结论:门)端粒酶活性与细胞凋亡在CA皮损中明显增强;() Fas系统参与了 CA皮损的细胞凋亡,Fas、FasL和 TRAIL介导的凋 亡可能在 CA的发生与复发中起到重要的作用;门)FasL和 TRAIL 可能通过通过直接或间接的方式影响皮损真皮局部单个核细胞的凋 亡,从而使机体自身免疫能力降低。 第二章:卡介菌多糖核酸对 CA患者血清 ILl 及 IFN-Y的影响 方法:将60例CA病人随机分为处理组30例(肌注BCG干SN+局 部电灼术+全身常规抗病毒药物)和对照组30例(局部电灼术+全身 常规抗病毒药物人 采用双抗体夹心ELISA技术分别检测治疗前后两 组思者血清 IL刁、IFN-Y水平,并与 2 5例健康对照者进行比较。 结果:与正常人比较,治疗前CA患者血清几l 水平显著增高, IFN-x水平显著降低,二者间 呈显著负相关(r=-0.269,P<0.05); 处理组治疗后的 IL习 水平显著降低而 IFN-Y水平显著增高,而对 照组治疗前后的 ILl、IFN-Y水平无显著性差异,且处理组复发率 低于对照组,有显著差异吓< 0.05人 结论:CA患者血清IL* 水平显著增高,IFN-Y水平显著降低, 提示“患者存在仆1八 型细胞因子失衡,免疫调节剂BCG干SN治 且且 博I-学位论义 中义摘要 疗有助于改善此种失衡,并降低临床复发率。 第三章:卡介菌多糖核酸对加患者叩以C凋亡的影响 方法:采用免疫组化法检测BCGPSN治疗前后处理组与对照组 患者PBMC凋亡相关分子Fas、FasL、TRAIL的表达。采用TUNEL 法检测凋亡细胞。 结果:治疗前CA患者PBMC中Fas、FasL、TRAIL分子的表 达明显高于正常人o刃刀5人 且凋亡指数与Fas的表达程度呈正相 关。BCGPSN治疗组经治疗后Fas、FasL、TRAIL的表达显著减少, (P<0.05),而对照组则无差异(P>0.05)。 结论:*A患者P**C存在异常的细胞凋亡,这可能是引起*A 患者细胞免疫功能受限,复发率高的另一重要因素。BCG干SN可能有 助于提高患者的细胞免疫功能。 第四章:蛋白质组技术在CA研究中的初步应用*A皮损的蛋白质 双向凝胶电泳分析) 方法:双向凝胶电泳技术Q.DE)分离 CA患者皮损组织与自身 包皮组织的总体蛋白质,银染法获取凝胶电泳图象,ImageMast软件分 析CA患者皮损组织蛋白质组的表达并将其与自身包皮组织进行比 较。 结果:*两者总蛋白质的分布模式非常相似:均以 PH 4。5-7.5和 Mr25-70kD范围的蛋白质斑点分布最多,且两者在碱性端及小分于 量处(与漠酚蓝分子量相近)均有明显深染的蛋白质点;o)在CA皮 损图谱中探测到了约650个点,在对照包皮组织中探测到约550个点, 并在CA皮损组织中发现了不能与对照包皮组织匹配的蛋白点287个 l且二 博卜学位论义 中义摘要 和表达丰度有显著差别 ( 0倍以上)的蛋白点 53个。 结论:O)*A患者的


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