收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

神经干细胞移植治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

王霞  
【摘要】: 尽管当今围产期监测、孕期和新生儿监护等方面的医疗技术取得了长足的发展,但近十年来,新生儿缺血缺氧性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)的发生率却无明显降低,平均每1000个活产足月儿中,就有3~4个婴儿发病,早产儿的发病率更高,其中10%~60%在新生儿期死亡,25%以上的患儿遗留永久的神经心理缺陷,如脑瘫、精神发育迟滞、学习困难和癫痫。而且,目前的治疗仅局限于支持疗法,而没有直接阻止脑损伤进程或促进损伤神经再生的措施。神经组织或细胞移植为恢复损伤的神经系统功能提供了有希望的新途径。在最开始的移植研究中,研究者多采用胎脑组织或细胞作为移植的供体,胎脑组织具有抗原性低和能够无氧代谢等特点,移植后易于存活,并能与宿主脑整合,可产生较好的治疗效果。但胎脑组织移植要求“点对点”移植,不同的移植部位需要来源于相对应部位的脑组织,否则就不能形成正常的纤维投射, ———— 而且胎脑组织来源有限,还面临着医学伦理学的问题,临床应用受限, 因此近年来人们致力于寻找其他的供体。癌细胞系和永生化的细胞系 移植治疗缺血性脑损伤也取得了良好的疗效,但由于细胞类型单一而 且存在致癌危险性也限制了它的使用;骨髓基质细胞出one marrow sromal cells,BMSCs)移植可明显改善脑损伤后的神经功能缺陷, 由于其分化为神经细胞的比例低,其治疗机制认为主要与其分泌的多 种细胞因子有关。BMSCS移植后能否分化为有功能的神经元,目前 尚无定论,而且移植后会在脑内遗留许多非神经系统的细胞,作为移 植的供体,其利弊还需进一步斟酌。神经干细胞(neural stem cells, NSCS)可在体外传代、长期培养、大量增殖,也可低温保存而维持 其末分化、未成熟、多潜能的特性不变,经体外诱导可以分化为各种 成熟的神经细胞表型,如神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞等; NSCS脑内移植后,不仅可以在脑内发育、分化、成熟形成有功能的 神经元,而且还能长期存活,接受局部的信号分化为相应的神经元, 与宿主脑建立起复杂的神经联系。至今为止,尚未见NSCS脑内移 植形成肿瘤的报道。NSCS作为脑移植的供体,克服了上述供体细胞 的局限性,不难看出,NSCS在脑损伤的治疗上具有广阔的应用前景。 目前,在使用 NSCS移植治疗缺血性脑损伤的动物实验和临床 实验中,均己取得了一定的疗效,但是这些研究结果大多来自于成年 动物和成年人,治疗新生动物模型少见。由于成年期动物宿主对移植 物的反应与新生期动物是不同的,因此,NSCS移植对治疗 HIE是 否有效尚需进一步研究。 1二 一 本研究旨在观察NSCs移植对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (hypoxic-ische加c brain damage,HIBD)模型神经行为和脑组织病 理学的影响,以期为NSCs移植治疗新生儿HIE提供实验与理论依 据;同时对脂质体介导外源性基因导入NSCs的条件进行优化,为 NSCs作为基因治疗载体提供实验依据。 研究包括以下三部分。 一、大鼠胚胎神经于细胞的分离培养及鉴定 目的 建立胎鼠神经干细胞的分离、培养及分化鉴定技术;观 察NSCs 的生长、增殖及分化的特点。方法 分离胎龄 14 d的 Sprague-Dawlcy侣D)大鼠胚胎前脑皮质,经消化及机械吹打后采用 无血清悬浮培养的方法获得细胞克隆。应用间接免疫荧光方法,鉴定 NSCs和分化的神经细胞。结果 从SD大鼠胚胎前脑皮质分离的组 织经原代和传代培养均可形成细胞克隆,并具有增殖的能力。原代和 传代细胞抗原nestin呈阳性。分化后的细胞可表达神经元和星形胶质 细胞的特异性抗原NF七00和GFAP。结论 胎鼠NSCs具有自我更新 和分化潜能,有很强的增殖能力,经体外培养能够分化成为神经元及 星形胶质细胞。 二、绿色荧光蛋白转染胚鼠神经干细胞 目的 探索脂质体介导目的基因转染NSCs的最佳条件,为 NSCs移植研究提供追踪的方法,为NSCs作为基因治疗的载体提供 实验依据。方法 分离培养胚胎大鼠NSCS,使用pEGFP(。作为报 道基因,5脂质体Lipofectamne 2000一起转染NSCs,观察脂质体 ill 扛 一 转染后绿色荧光蛋白的表达的量效与时相关系;筛选稳定表达绿色荧 光蛋白(reen luorescent protein,GFP)的细胞克隆,观察其生长特 性:将筛选出的细胞克隆用立体定位仪植入新生*D大鼠侧脑室内, 观察绿色荧光蛋白的表达。结果 使用脂质体Lipofectalnine 2000 介导绿色荧光蛋白质粒转染NSCs,转染时间在5~8小时左右,脂 质体(卜1)/**A(卜9比值在1二与1:2之间,*FP表达高峰在 转染48小时左右;转染GFP基因的NSCS的生长特性无明显改变, 诱导分化后仍然能有效表达GFP,移植到新生SD大鼠侧脑室后,在 体内也可有效表达GF


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 贺月秋;陈惠金;钱龙华;陈冠仪;;经脑室神经干细胞移植对脑室周围白质软化新生大鼠的脑病理评估[J];中国当代儿科杂志;2008年03期
2 阴育红,王国辉,朱晓峰;GM—1对新生大鼠神经干细胞增殖和分化的影响[J];黑龙江医药科学;2005年02期
3 佟雷;王振宇;季丽莉;佟晓杰;;ERK信号转导通路对新生大鼠海马神经干细胞增殖的影响[J];解剖科学进展;2011年03期
4 贺月秋;陈惠金;钱龙华;陈冠仪;;胶质细胞源性神经营养因子联合神经干细胞移植治疗脑室周围白质软化新生大鼠的疗效观察[J];临床儿科杂志;2009年10期
5 高伟东;李晓冬;;胚胎神经干细胞对脑损伤治疗作用的实验研究[J];解剖学研究;2010年01期
6 林海,陈燕惠,陈达光,陈敏;早期干预改善宫内缺氧缺血性脑损伤新生大鼠学习记忆能力的效果评价[J];中华围产医学杂志;2005年03期
7 姜红;许锋;周春清;李向红;舒志荣;;促红细胞生成素干预缺氧缺血性脑损伤新生鼠神经干细胞巢蛋白的表达(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年36期
8 沈云东;徐建光;徐文东;徐雷;陆九州;顾玉东;;绿色荧光蛋白转基因大鼠神经干细胞体外分化与体内移植的实验研究[J];中华手外科杂志;2007年04期
9 方兴,黄红英;神经干细胞移植治疗神经系统疾病的实验研究进展[J];中西医结合心脑血管病杂志;2005年06期
10 杨慧敏;王顺和;;新生大鼠神经干细胞的分离、培养和鉴定[J];川北医学院学报;2007年01期
11 张伟宏;李宛青;王金国;刘桂萍;杨华山;王璐璐;;激光调控内源性神经干细胞的增殖分化及脑功能重建(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年32期
12 唐源远;赵久红;季丽莉;王立芹;王振宇;;胰岛素诱导低血糖对新生大鼠海马神经干细胞增殖和分化的影响[J];新乡医学院学报;2009年01期
13 王立芹;赵久红;唐源远;季丽莉;王振宇;;星形胶质细胞条件培养液促进新生大鼠海马神经干细胞分化[J];解剖科学进展;2009年03期
14 贺月秋;陈惠金;钱龙华;陈冠仪;;经脑室植入神经干细胞在脑室周围白质软化新生大鼠脑内的迁移分化[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年49期
15 祝胜;神经干细胞在脑外伤中的治疗前景[J];现代诊断与治疗;2003年01期
16 赵久红;崔燕;唐源远;季丽莉;王立芹;王振宇;;缺氧对新生大鼠海马神经干细胞增殖和分化的影响[J];解剖科学进展;2009年02期
17 王晓莉;杨于嘉;谢岷;王庆红;余小河;;高压氧治疗促进HIBD新生大鼠内源性神经干细胞的迁移与分化[J];中国当代儿科杂志;2009年09期
18 李学坤,郭安臣,左萍萍;神经干细胞的研究进展及应用前景[J];基础医学与临床;2002年04期
19 冯定庆;神经干细胞的基础研究进展及应用前景[J];解剖学研究;2004年01期
20 李学坤,张卿,郭安臣,左萍萍;移植的神经干细胞在帕金森病模型小鼠脑内的存活与分化[J];中国康复理论与实践;2003年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李敏杰;刘勇;吕海侠;张蓬勃;肖新莉;李捷;康前雁;邓美英;丁海燕;;新生大鼠神经干细胞的分离培养与观察[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
2 刘军楼;王海燕;高祥亭;刘冬焱;王丽敏;;Memantine对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤保护作用及机制探讨[A];中国康复医学会首届儿童康复学术会议暨中国残疾人康复协会第八届小儿脑瘫学术会议论文汇编[C];2004年
3 高方友;杨辉;张治元;何家全;刘仕勇;邱克军;;重组质粒pEGFP-mD1x5的构建及其在室管膜前下区神经干细胞中的表达研究[A];贵州省医学会神经外科学分会第七届学术交流会暨神经外科学新进展学习班论文集[C];2006年
4 李成仁;李巍;陈德英;蔡文琴;;NOV基因修饰神经干细胞移植促进脊髓损伤大鼠脊髓功能的恢复[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年
5 罗杰峰;詹珊珊;;脂质体介导绿色荧光蛋白基因转染神经干细胞的实验研究[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
6 王爽;谢鹏;吕发金;罗天友;方维东;;新生大鼠神经干细胞体外培养、鉴定及分化的实验研究[A];中华医学会第十三届全国放射学大会论文汇编(下册)[C];2006年
7 田东萍;苏敏;吴贤英;张舸;;硒、B-27在神经干细胞球存活与分化中的作用[A];中华医学会病理学分会2005年学术年会论文汇编[C];2005年
8 刘之荣;;A2McDNA片段修饰的神经干细胞与Aβ作用的实验研究[A];第九次全国神经病学学术大会论文汇编[C];2006年
9 崔曙东;周文浩;陈超;;3日龄新生大鼠慢性脑缺血后脑室下区神经干细胞增殖研究[A];中华医学会第十四次全国儿科学术会议论文汇编[C];2006年
10 李力;万琪;刘永红;张巍;;小鼠神经干细胞培养及缺血神经元对其增殖、分化的影响[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王霞;神经干细胞移植治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤[D];中南大学;2003年
2 李峰;颈动脉神经干细胞移植治疗脑出血后遗症的时间窗及疗效的动物实验研究[D];山东大学;2007年
3 张力;人胚神经干细胞及骨髓基质细胞移植治疗帕金森病恒河猴模型的实验研究[D];复旦大学;2003年
4 李巍;神经干细胞的分化调控及BDNF基因修饰后对大鼠脊髓损伤修复的研究[D];第三军医大学;2002年
5 高国一;胎鼠脑神经干细胞鉴定纯化与生物学特性观察[D];第二军医大学;2002年
6 朱巍;转基因神经干细胞移植对脑缺血后神经血管保护作用的研究[D];复旦大学;2003年
7 梁日生;转TrkC基因神经干细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究[D];复旦大学;2005年
8 郑敏;神经干细胞定向分化与移植治疗帕金森病的实验研究[D];重庆医科大学;2003年
9 李立新;甲基强的松龙和神经干细胞移植修复脊髓损伤的实验研究[D];复旦大学;2002年
10 卢洪流;成年大鼠脑内神经干细胞的在体研究[D];第二军医大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈宁;新生大鼠视网膜神经干细胞的分离培养与诱导分化[D];中南大学;2003年
2 刘廷磊;新生大鼠海马齿状回神经干细胞的鉴定、分化及GM-CSF mRNA的表达[D];郑州大学;2003年
3 唐源远;胰岛素诱导低血糖对新生大鼠海马神经干细胞增殖和分化的影响[D];中国医科大学;2009年
4 范亚珍;脐血源性神经干细胞中Foxg1和Nestin的表达及移植对HIBD新生大鼠影响的研究[D];郑州大学;2010年
5 乔丽丽;LPS对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的增敏作用[D];郑州大学;2002年
6 姜敏;新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的亚低温治疗[D];郑州大学;2002年
7 宋精梅;比较新生大鼠脑部不同部位的神经干细胞被诱导分化为少突胶质细胞的差异[D];福建医科大学;2010年
8 赵久红;缺氧对新生大鼠海马神经干细胞增殖分化的影响[D];中国医科大学;2009年
9 尹梅;低体积分数氧预处理对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织脑红蛋白变化的影响[D];兰州大学;2009年
10 熊金国;雌激素、氟桂利嗪对缺氧缺血新生大鼠脑细胞的影响[D];延边大学;2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 熊明山;日成功移植人类神经干细胞治疗猴子脊髓伤[N];中国高新技术产业导报;2001年
2 时仲省 高思敏;移植神经干细胞 瘫痪兔子可爬行[N];大众卫生报;2001年
3 王成应;能克隆的神经干细胞被分离[N];健康报;2004年
4 孙国根;神经干细胞并非“全能制造者”[N];中国医药报;2009年
5 刘海英;脑癌源于脑下室区的神经干细胞[N];科技日报;2009年
6 孙国根 白毅;灵长类脑内神经干细胞被发现[N];中国医药报;2011年
7 沈丽 付钰;神奇的神经干细胞[N];科技日报;2002年
8 吴一福;细胞移植治疗心肌梗死研究新进展[N];中国医药报;2003年
9 ;“绿色荧光蛋白”能追踪癌细胞[N];江苏科技报;2008年
10 北京康复中心神经外科 黄红云;神经干细胞之谜[N];健康报;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978