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三氧化二砷诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡分子机制的研究

肖涛  
【摘要】: 目的:研究三氧化二砷(As_2O_3)对骨肉瘤MG-63细胞凋亡的诱导作用,初步探讨该作用的分子机制。方法:培养细胞用As_2O_3处理后,MTT法检测细胞的增殖变化、TUNEL法检测细胞内DNA的裂解情况、琼脂糖凝胶电泳观察DNA断裂的梯形条形、透射电镜检测细胞形态学的变化及凋亡小体的形成、并用流式细胞仪进一步确证As_2O_3诱导MG-63细胞凋亡作用。同时采用SABC法检测处理前后bc1-2基因表达的变化,高通量的基因芯片检测技术筛选处理前后凋亡相关基因表达变化。结果:As_2O_3可有效地抑制MG-63细胞增殖,随着药物浓度增高其抑制作用增强,且细胞出现典型的凋亡变化。TUNEL法呈阳性结果。DNA琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯形条形。透射电镜下可见细胞核仁消失、碎裂,胞内空泡增多,染色质浓缩聚集。流式细胞仪检测出现典型的凋亡峰,并使细胞周期中的G_0-G_1期延长,但bc1-2基因表达未见明显变化。基因芯片检测结果显示凋亡抑制基因IEX-1表达下降。结论:As_2O_3可抑制骨肉瘤细胞的增殖,诱导骨肉瘤细胞凋亡,但其作用机制不是通过下调bc1-2基因的表达,而很可能是通过下调凋亡抑制基因(生长促进基因)IEX-1的表达,进而使细胞停滞在G_0-G_1期,细胞增殖生长放慢,凋亡增加。


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