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骨髓基质细胞心肌移植的初步研究

唐滔  
【摘要】: 背景:心室重构是心梗后进行性心衰和死亡的重要原因。尽管心梗后作为对心肌缺血的适应性反应和心室重构过程之一,机体通过毛细血管增殖来促进冠状动脉侧枝循环的建立,然而在大多数情况下,此代偿过程是不完全的。促进冠状动脉侧枝循环的形成和开放,可改善心肌缺血,减轻心室重构。骨髓基质细胞是多能干细胞,具有潜在诱导缺血区组织血管再生的功能。由此我们将骨髓基质细胞移植入大鼠心梗区中,探讨其对大鼠心梗后血管新生和细胞因子VEGF、TGF的作用。 方法:采用近交系大鼠模拟自体移植。取大鼠骨髓基质细胞进行体外培养、增殖和标记,同时以液氮冷冻左室游离壁建立心梗模型。4周后分别将2×10~6个细胞悬液或冷D-Hanks液注入心梗区数个不同部位。于移植后1周、2周和4周依次获取心梗区标本,进行细胞形态学观察,毛细血管密度测定和RT-PCR检测细胞因子VEGF、TGF-βmRNA的表达。 结果:共建立近交系大鼠心梗模型30只。采用贴壁分离法获取骨髓基质细胞,成功体外培养、传代、扩增至2-5×10~6个/瓶。BrdU标记细胞,体外证实标记效率为80%。免疫组化检查发现骨髓基质细胞于移植后1周、2周和4周后均可存活并具有分化成熟倾向。Ⅷ因子多克隆抗体毛细血管染色显示移植后第1、2及4周心梗区单位面积(0.1mm~2)毛细血管数实验组(67.600±7.162、43.200±1.087、32.800±2.168)较对照组(22.800±1.924、20.800±2.280、18.800±2.108)均明显增加(P<0.01),但毛细血管数有随时间推移而逐步减少的趋势(P<0.01)。RT-PCR检测发现VEGFmRNA术后第1、2及4周的表达水平实验组(3.426±0.043、1.536±0.024、0.729±0.010)与对照组(2.689±0.045、1.245±0.016、0.463±0.007)相比均增加(P<0.01),且随着时间的推移其表达量两组均呈迅速降低的趋势(P<0.01)。TGF-βmRNA在术后第1、2及4周的表达水平实验组(0.445±0.014、1.034±0.015、0.393±0.018)与对照组(2.000±0.023、1.502±0.035、1.351±0.173) 博士学位论文 摘要 相L均降低(P<0刀1)。 结论: l、骨髓基质细胞易于培养和增殖。 2、骨髓基质细胞心梗区移植后可较长期存活并有分化成熟倾向。 3、骨髓基质细胞心肌移植可促进心梗区血管新生。 4、骨髓基质细胞心梗区移植后可促进VEGF生成,抑制TGF.p合成。从而 有利于血管新生和减轻。O室重构。


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