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新生大鼠视网膜神经干细胞的分离培养与诱导分化

陈宁  
【摘要】: 由于成熟神经细胞缺乏再生能力,中枢神经系统损伤后自我修复能力很差。近年来干细胞研究的深入已为中枢神经系统损伤与退行性病变的治疗带来了希望。青光眼及老年性黄斑变性等主要致盲眼病的病理变化中都伴有视网膜神经元的大量死亡,被称为不可逆性致盲眼病,医学上致今仍无有效的治疗方法。本实验尝试从新生大鼠视网膜分离神经干细胞,并对视网膜神经干细胞(retihal neural stemcells,RNSCs)的分化潜能进行研究,同时加入脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor.BDNF)等物质,探索诱导RNSCs向神经元分化的条件,旨在为RNSCs应用于临床治疗视网膜神经元缺损及变性疾病提供必要的实验资料和理论基础。从新生大鼠(出生24hr内)视网膜分离具有自我更新能力的细胞克隆,传代。用BDNF与血清单独或联合培养诱导其分化,采用免疫组织化学技术对分化前后的细胞进行鉴定。结果显示:分离获得的细胞具有连续克隆的能力并表达神经干细胞标志物nestin。分化后细胞分别表达MAP-2、NF-200与GFAP等多种神经元及神经胶质细胞的特异性标志物,少量细胞表达GAD、TH、ChAT、GABAR_A与NR_1等多种神经元递质或递质受体的标志物;BDNF单独作用可减少RNSCs的凋亡,BDNF与血清联合作用可使细胞向神经元分化的比例提高。提示新生大鼠视网膜内存在具有自我更新与多分化潜能特性的神经干细胞,经诱导可分化为神经胶质及神经元样细胞,表达多种神经递质及其受体;BDNF作为辅助诱导剂,可促进RNSCs存活、分化、成熟,并可能能诱导其向神经元方向分化。


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