金银花有效成分的提取工艺及指纹图谱表征研究

【摘要】：金银花为忍冬科(Caprifoliaceae)植物忍冬(Lonicera japonica Thunb．)的干燥花蕾，为中医常用药，具有清热解毒、凉风散热、抗病毒、保肝利胆的功能。其主要活性成分为绿原酸和异绿原酸，别的药性成分还有黄酮类、挥发油等。本文主要研究了金银花中主要成份的提取工艺、金银花提取物的高效液相色谱分析以及金银花提取物的抑菌作用。 在金银花提取工艺的研究中，对水提法、醇提法、水提醇沉法以及酶解法各种方法进行了详细的研究，分别以提取物的得率和绿原酸的得率来比较各种方法的优劣。实验结果可知：以绿原酸得率作为指标来考察各种方法的优劣，尤以酶解法为最好，绿原酸的得率可达到12.82％，其次为醇提法较好，绿原酸的得率为10.05％；以提取物的得率作为指标来考察，也是以酶解法为最好，提取物的得率可达到37.63％，而其他方法较低。由此对酶解法，探讨了酶用量、酶处理时间、酶处理温度及酶的联合作用对绿原酸得率的影响。酶处理时间和酶用量对绿原酸得率有相同的效果，即减少酶用量，增加酶处理时间可以达到增加酶用量，但减少酶处理时间同样的效果；纤维素酶处理的最适温度为40℃—50℃。 在对金银花提取物的高效液相色谱分析中，对流动相进行了优化选择，分别实验了甲醇-水-冰醋酸、甲醇-10％磷酸氢二钠(pH=2.7)、甲醇-0.1mol／l磷酸二氢钠溶液(pH=2.7)、乙腈-水-冰醋酸等作为流动相，结果以甲醇-水-冰醋酸(30：70：0.5)为最佳。绿原酸与相邻峰基线分离较好。在此条件下记录297nm、310nm、325nm下三个波长的色谱图，结果波长为325nm的条件为最佳。绿原酸峰的保留值为4.2min，将各色谱峰按大小顺序排列，并列出相应色谱峰的相对面积Ar的计算公式如下： Ar=(待测峰的面积值／参照物的面积值)利用上述公式来建立金银花提取物的高效液相色谱峰的特征峰群，从而将所有色谱图的共有峰作为依据，建立一个金银花的特征指纹图谱。依此可以鉴别金银花的不同品种、不同提取方法、并可鉴别金银花品种的真伪。 在金银花提取物的抑菌实验中对13种不同的菌种进行了实验，结果表明金银花的提取物对金黄色葡萄球菌和金莉菌有明显的抑菌 硕士学位论文 摘要 作用，而对其它菌种无明显抑菌作用。同时测定了金银花提取物对金 黄色葡萄球菌和金莉菌的最小抑菌浓度(MIC)，其中对金黄色葡萄球 菌金银花提取物的MIC为6.25mg/m1，相对于绿原酸的抑菌浓度为 1.81 mg/ml。对金莉菌提取物的M工C为12.50 mg/m1，相对于绿原酸 的抑菌浓度为3.62 mg/m1。