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杜仲中高纯活性成分的分离制备新工艺研究

彭密军  
【摘要】:本文立足于药效实际,从杜仲原料出发,采用制备高效液相色谱分离、天然澄清剂絮凝、超滤、大孔吸附树脂纯化等现代分离技术,并运用色谱保留和吸附平衡等理论优化工艺参数,分离纯化出可用于新药开发的四种高纯活性化合物和两种杜仲活性部位产品,走出了一条对杜仲进行精深加工和综合开发的新工艺路线,取得了一系列有意义的成果: 1.对杜仲原材料进行提取工艺研究。通过对原材料进行研究,筛选出杜仲鲜皮为提取环烯醚萜化合物京尼平甙酸(GPA)、桃叶珊瑚甙(AU)和京尼平甙(GP)的原料;杜仲叶为提取杜仲绿原酸(CA)的原料。首次将微波提取技术应用于杜仲活性成分提取,同时与常规浸提、超声波提取等方法进行比较研究,确定了合适的工艺参数。研究证明:超声波提取法快速、高效,但选择性不好;微波提取效果最佳,不仅快速、高效,而且选择性好、稳定性高、能耗低,前景突出。 2.对杜仲提取物进行纯化工艺研究。杜仲皮提取物采用溶剂萃取、大孔吸附树脂分离纯化以及特种吸附剂处理等方法将环烯醚萜类物质富集纯化,得到环烯醚萜活性部位;杜仲叶提取物采用天然澄清剂絮凝、超滤膜分离及树脂纯化组合工艺富集纯化得到CA活性部位。研究表明此方法操作简单、易于扩大、能耗低、材料可反复使用。 3.运用高效液相色谱制备技术对GPA、AU、GP及CA等活性成分进行分离制备研究,提出了在一个制备流程中同时得到三种高纯产品的新工艺。 根据色谱保留理论首次建立了制备色谱流动相组成与保留因子之间关系的保留模型,用于优化色谱分离参数;探讨了环烯醚萜类化合物结构与其色谱保留行为之间的关系,总结出该类化合物色谱洗脱规律;对制备色谱流动相组成、流速、洗脱方式、进样量、进样体积等工艺参数进行优化,创造性地在制备色谱上提出了速度梯度和台阶梯度洗脱法,得出同时制备GPA、AU和GP三种产品的工艺条件;制备出四种高纯产品,其中GPA和AU单体产品填补了国内空 白。同时充分考虑了溶剂回收、杜仲资源综合利用等问题,实现了 绿色化工。 4.对杜仲活性成分进行分析方法研究。提出了杜仲皮中三种主 要环烯醚菇类化合物的RP--HPLC同时分析方法,适用于原材料及产 品的质量控制,快速、准确;建立了同时快速测定杜仲叶及制剂中 GPA和CA的RP一HPLC方法;建立了回收率高、专属性强、重现性好 的HPLC一MS法;给出了高效灵敏的AU分光光度法。 采用均匀设计试验对AU分光光度法复杂的显色条件进行优化, 得出最佳显色参数;并将反馈人工神经网络法应用于AU显色条件参 数的优化预测,得到较好的拟合结果,展示了这种新方法在该领域 的应用前景。 5.对四种高纯单体产品进行结构表征和稳定性研究。采用紫外 (UV)、红外(IR)、核磁共振(HMR)‘3C谱和‘H谱以及质谱(MS) 等手段对GPA、AU、GP及CA进行结构表征,并考察了它们对酸、 碱、有机溶剂、光、热等因素的稳定性。 6.对杜仲活性成分进行生物活性研究。通过建立的相关动物实 验模型首次对杜仲CA活性部位进行药效研究,实验表明:杜仲以 活性部位在治疗老年痴呆症(AD)方面显示出明显的效果。


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