收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

羟基磷灰石纳米粒载体介导的大鼠肝细胞体内外基因转染实验

刘勤  
【摘要】:实验一 pEGFP-C1质粒的转化、抽提及鉴定 目的:制备可供基因转染所需的增强型绿色荧光蛋白质粒pEGFP-C1。 方法:采用氯化钙法制备E.coli JM109感受态,将pEGFP-C1转化此感受态菌,经选择性培养基筛选将阳性转化菌落进行扩增。采用碱裂解法小量抽提质粒,经EcoR Ⅰ酶切鉴定为阳性克隆后再扩大培养,用碱裂解法大量抽提,再次酶切鉴定并检测质粒的浓度和纯度。 结果:感受态制备的实验组细菌在含卡那霉素(Kanamycin)的琼脂平板上形成了克隆,而对照组未能形成克隆。抽提的质粒经EcoR Ⅰ酶切后显示一条带,其大小为4.7kb,符合pEGFP-C1的长度。五次质粒大量抽提的pEGFP-C1的A260/A280均在1.8~2.0间,浓度为0.87~1.75μg/μl间。 结论:1.氯化钙法能有效地制备感受态菌,转化pEGFP-C1质粒的E.coli JM109表达Kanamycin抗性基因。2.抽提的质粒经酶切分析证实为pEGFP-C1。3.碱裂解法方法可靠,质量稳定,重复性好,大量抽提的pEGFP-C1浓度和纯度均能满足基因转染的要求。 实验二 羟基磷灰石纳米粒的制备、表面修饰及与DNA的结合 目的:制备经多聚赖氨酸表面修饰的羟基磷灰石纳米粒,研究其与质粒DNA结合的能力。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李明春;梁东升;李友伟;刘莉;;右旋糖苷衍生物纳米粒对人乳腺癌细胞的转染作用研究[J];中国药理学通报;2008年08期
2 段菁华;张阳德;王伟宁;廖明媚;赵劲风;;聚氰基丙烯酸正丁酯纳米颗粒的表面修饰和转染[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年34期
3 赵梦丹;杨峰亮;陈坚;虞和永;;多聚乙烯亚胺介导基因转染的体外研究[J];中国药学杂志;2008年16期
4 童林艳;基因治疗与血脑屏障[J];国外医学.神经病学神经外科学分册;2003年05期
5 陈晓爱;周艳芳;邓宇斌;;聚乙二醇-聚乙烯亚胺纳米微囊介导质粒转染骨髓间质干细胞[J];中国科学:生命科学;2010年08期
6 刘春喜;张娜;;层层自组装纳米粒作为非病毒基因载体[J];生命的化学;2011年04期
7 姜民慧;单纯疱疹病毒胸苷激酶基因转染联合药物对卵巢癌细胞的杀伤效应[J];中华医学信息导报;1997年17期
8 吕明德,郑云,黄嘉凌,萧定璋,李树浓;B7-1和IL-12基因转染对肝癌细胞免疫原性的影响[J];中国普外基础与临床杂志;2000年04期
9 陈宝安,朱梁军,朱敏生,潘英,杜娟,陈苏宁,王骏,邵泽叶;重组载体pLNCX/iNOS的构建及其在NIH3T3细胞中滴度的测定[J];东南大学学报(医学版);2002年02期
10 廖应熙,李泽辉;纳米给药系统的研究与比较[J];天津药学;2003年04期
11 陈传好,韩卉,陈昌杰;大鼠失神经支配表情肌NT-3基因转染的实验研究[J];蚌埠医学院学报;2004年02期
12 王学清,陈真,戴俊东,张涛,夏桂民,张强;不同助悬剂对环孢素A羟丙甲纤维素酞酸酯纳米粒大鼠口服后体内相对生物利用度的影响[J];北京大学学报(医学版);2004年03期
13 白晓峰,田卫东,陈希哲,李志勇;人血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠骨髓基质细胞的实验研究[J];四川大学学报(医学版);2005年04期
14 尤长宣 ,罗荣城 ,苏瑾 ,张军一 ,廖旺军 ,郑航 ,Yong Liu ,Paul L Hermonat;BA46基因转染树突状细胞治疗乳腺癌的研究[J];中华微生物学和免疫学杂志;2005年07期
15 顾正勤,许传亮,高旭,孙颖浩,李云,沈茜;腺病毒介导hIL-2基因转染膀胱上皮的体内研究[J];临床泌尿外科杂志;2005年11期
16 康春雨,章庆国;人骨形态发生蛋白-2真核表达质粒的制备、转染及表达[J];现代医学;2005年05期
17 陈云超;张青萍;David O.Cosgrove;Martin J K Blomley;;共聚物在超声介导基因转染中的新功能[J];中华超声影像学杂志;2005年11期
18 潘海涛;郑启新;杨述华;刘勇;;B7-1基因转染对骨肉瘤细胞生物学行为的影响[J];中国癌症杂志;2005年06期
19 赵欣;杨向军;白霞;周玲;李红霞;程绪杰;蒋彬;蒋文平;;脂质体介导hHCN2基因转染HEK293细胞[J];江苏医药;2006年05期
20 孙延庆;李红玲;杜君宏;张旭霞;;脂质体介导的hTERT基因反义核酸对K562细胞端粒酶活性的影响[J];西部医学;2007年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 赵雪;任慧霞;;壳聚糖及其衍生物作为基因递送载体的研究进展[A];山东省药学会第一届学术年会论文集(下)[C];2005年
2 王季石;胡秀英;方琴;谢建琼;崔欣;;ALDH2基因转染对白血病细胞增殖与凋亡的影响[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
3 李硕;王波林;余孝其;;用于基因转染的可降解大环多胺聚合物的合成[A];大环化学和超分子化学的新发展——当前学科交叉的一个重要桥梁——中国化学会全国第十五届大环化学暨第七届超分子化学学术讨论会论文摘要集[C];2010年
4 贾向旭;张雪峰;袁丽珍;江国春;鲁茁壮;魏康;;p21基因转染提高了辐射抗性肿瘤细胞的辐射敏感性[A];中华医学会放射医学与防护学分会第二次中青年专题研讨会论文汇编[C];1999年
5 赵永波;王枫;李钰;;t-PA基因转染AGZY83-a细胞移植入小鼠体内的表达研究[A];第三届全国少数民族地区神经病学会论文汇编[C];2005年
6 张东山;刘伏友;陈香美;彭佑铭;;超声微泡系统介导基因转染大鼠肾脏的实验研究[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年
7 王书侠;陈芳芳;贾丽;赵晓琴;武建国;虞伟;李晓军;;人分化抑制因子3在A549/DDP细胞中的表达及作用[A];全国临床免疫检验研讨会暨第六届全国临床免疫学术会议论文汇编[C];2009年
8 贾赤宇;陈璧;;hTGFβ1基因转染对NIH3T3成纤维细胞体外增殖的影响研究[A];中华医学会第五次全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];1997年
9 李玮;谭建;方佩华;李宁;;人钠碘转运体基因转染胶质瘤细胞介导放射性碘治疗的体外研究[A];第四届中国核学会省市区“三核”论坛论文集[C];2007年
10 李慧武;戴尅戎;汤亭亭;严孟宁;郁朝锋;张晓玲;岳冰;楼觉人;;人骨形态发生蛋白-2基因转染脂肪源性间充质干细胞的成骨研究[A];2005年上海市生物医学工程学会学术年会论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘勤;羟基磷灰石纳米粒载体介导的大鼠肝细胞体内外基因转染实验[D];中南大学;2005年
2 曹毅;用基因打靶技术构建恶性疟原虫MSP1转基因鼠疟模型及其应用[D];第二军医大学;2005年
3 梁日生;转TrkC基因神经干细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究[D];复旦大学;2005年
4 张瑞芬;金属硫蛋白与乳腺癌关系的研究[D];中国协和医科大学;1999年
5 周艳;乳腺癌ERβ表达的临床意义及其与他莫昔芬治疗耐药相关意义的初步研究[D];第三军医大学;2007年
6 欧雅莉;GDNF基因修饰脐血细胞并血脑屏障开放剂对高血压脑梗疗效的实验研究[D];中南大学;2009年
7 李晓强;转染VEGF165基因的内皮祖细胞移植治疗慢性深静脉血栓的实验研究[D];苏州大学;2008年
8 张蕾;聚丙交酯乙交酯纳米粒(PLGA-NP)介导P16-P53基因联合抑制人肝癌细胞的实验研究[D];中南大学;2007年
9 汪圣毅;腺病毒介导hIL-10基因转染联合IFN-γ抑制血管平滑肌细胞增殖及其机制的研究[D];复旦大学;2005年
10 张静;油酰壳聚糖纳米粒作为抗肿瘤药物载体的研究[D];中国海洋大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵颖;叶酸修饰壳聚糖靶向转基因载体的研究[D];武汉工业学院;2009年
2 李斌生;载绿色荧光蛋白基因壳聚糖纳米粒载体的制备和转染的研究[D];中南大学;2004年
3 佟媛;载银杏内酯A纳米粒的制备与理化性质研究[D];安徽大学;2010年
4 郭妍;纳米生物技术治疗肝癌:p53-白蛋白纳米粒的制备和转染的研究[D];中南大学;2004年
5 王娜;治疗高尿酸血症UOX脂质纳米粒的初步研究[D];重庆医科大学;2010年
6 张庆莲;米托蒽醌聚乳酸纳米粒的制备和细胞摄取研究[D];成都中医药大学;2011年
7 陈斌;巯基化壳聚糖-pDNA纳米粒的构建及其对HeLa细胞体外转染活性的研究[D];天津医科大学;2009年
8 吉顺莉;紫杉醇PLGA口服纳米粒的制备及生物利用度的研究[D];江苏大学;2010年
9 王同力;Tf-BCNU-PLGA纳米粒制备及其对鼠C6胶质瘤细胞作用的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
10 蒋妮;三种齐墩果酸纳米粒的制备及质量评价[D];大连医科大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 解放军总医院病理科 纪小龙;纳米技术在开拓新药中应用前景[N];中国高新技术产业导报;2001年
2 ;磁性阿霉素白蛋白纳米粒在移植性肝癌模型中的磁靶向性[N];中国医药报;2003年
3 记者 白毅;复合物纳米粒可作为胰岛素口服给药新载体[N];中国医药报;2006年
4 本报记者 刘云涛;DDS研发 唱响制剂时代主旋律[N];中国医药报;2007年
5 甘勇 林艳琼 陈庆华;微粒系统用于眼用制剂成新趋势[N];中国医药报;2006年
6 李悦恒张勇;纳米技术广泛用于眼部给药研究[N];中国医药报;2008年
7 本报记者 徐兰山阮湘华;纳米生物:创新在起跑线[N];科技日报;2008年
8 张中桥;四医大西京医院发现纳米粒可作 VEG F基因载体[N];中国医药报;2007年
9 平其能;纳米药物制剂的现状与未来[N];中国医药报;2002年
10 本报记者 刘云涛;前沿 创新 突破[N];中国医药报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978