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HSV-I扩增子载体转移HPPE基因在大鼠中枢神经系统镇痛效应及对免疫功能影响的研究

郭曲练  
【摘要】:慢性顽固性疼痛、癌性疼痛的治疗是临床工作中日益受到重视而又棘手的问题,目前实施的各种治疗方法都存在一定的局限性。疼痛的转基因治疗是将外源性阿片肽基因转移至体内表达并发挥生物学效应,这种方法可能提供满意的镇痛效果,且没有目前药物治疗方面的限制,是一种值得深入探讨的治疗措施。转基因治疗的方法很多,其中以复制缺陷的病毒载体转移目的基因的治疗方法在理论上具有高效、安全和稳定的特点,具有良好的应用前景。因此,本研究利用HSV-Ⅰ扩增子载体转移人前脑啡肽基因(HPPE),观察其在体转染的表达和对炎性疼痛大鼠的镇痛效应及免疫功能的影响。 目的:本研究采用嗜神经性的单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子载体经脑内注射和蛛网膜下腔注射两种不同的转基因途径转移HPPE到大鼠中枢神经元细胞中,观察报告基因LacZ和外源HPPE的共表达及对福尔马林炎性疼痛和热痛刺激的抗伤害作用。并观察转基因治疗对大鼠免疫功能的影响。为恶性疼痛的生物治疗探索有效途径及提供理论依据。 方法:构建含外源HPPE的重组单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子载体,用温度敏感型(31℃)HSV-Ⅰ病毒株包装和扩增,获得用于基因转染研究的假病毒颗粒。检测假型病毒滴度,原位组织化学染色检测报告基因LacZ的表达,用RT-PCR方法和放射免疫法检测HPPE的表达。利用脑立体定向技术将包装后的重组HSV-Ⅰ扩增子载体、空白载体或


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