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mdr-1 shRNA、Nef逆转K562/A02细胞MDR及增强STI571对耐药细胞敏感性的研究

肖希斌  
【摘要】:研究背景 化疗药物治疗肿瘤失败的主要原因是肿瘤细胞对药物产生耐药性。多药耐药(multidrug resistance,MDR)是指肿瘤细胞接触一种抗癌药物后产生的对多种结构和功能迥异的抗癌药物的耐受性。MDR的发生涉及多种机制,其中以肿瘤细胞过度表达mdr-1基因编码的ABC转运蛋白超家族成员膜P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp,P-170,MDR1,ABCB1)为主要的机制。MDR药物调节剂或增敏剂能通过抑制P-gp的外泵功能来阻止MDR的发生。但是它们的心脏毒性、免疫抑制、高胆红素血症、肾脏毒性等严重毒性和不良反应限制了临床应用。另外,肿瘤细胞对这类化疗增敏剂同样能产生再次耐药。因此有必要探寻毒性更低、更有效的方法来逆转MDR。 在以往的研究中,反义寡核苷酸能有效地逆转P-gp参与的MDR。而且核酶技术亦能有效地下调mdr-1 mRNA的表达。而近年来,RNA干扰(RNA interference,RNAi)由于其高效性,高特异性,高稳定性,可遗传性及RNAi在有效地沉默靶基因的同时,对细胞本身的调控系统没有影响等这些特点,越来越为人们重视。RNA干扰是利用双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱导序列特异的转录后基因沉默(posttranscriptional gene silencing)现象。现已发现RNA干扰现象广泛存在于从植物、真菌、昆虫、蛙类、鸟类、大鼠、小鼠到人类的几乎所有真核生物中。从低等生物到高等动物广泛存在RNA干扰机制,这说明RNA干扰机制在进化的很早阶段就已经产生,是生物体进化过程中的一种保守机制。RNA干扰机制经过了千万年选择与进化,是一种古老而多能的细胞水平的监督系统(细胞内的免疫系统)。通过此系统,细胞可以去除不需要的mRNA,降解畸变的RNAs,以及抑制如病毒、转基因、移位元件等的外源基因成分。RNAi技术利用外源性双链RNA,产生约21~23个碱基大小的有活性的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),诱导产生序列特异性基因沉默。其作用类似于基因敲除,但技术上更为简单、快捷。有研究小组开发表达载体在瞬时转染和稳定转染的哺乳动物细胞中持续表达siRNA,一些载体经过设计可以表达短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA),在体内加工后形成类似siRNA的分子,引发基因沉默。shRNA一般都是在RNA多聚酶Ⅲ(PolⅢ)启动子和4~5个T的转录终止位点之间插入,转


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