收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

HTRA1启动子区域的多态性与年龄相关性黄斑变性的关联性

曾杰西  
【摘要】: 目的:探讨染色体10q26上HTRA1启动子区域单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)与年龄相关性黄斑变性(Age-related Macular Degeneration,AMD)的关联性以及HTRA1(HighTemperature Requirement Factor A1、)在人眼各层次中的表达。 方法:1.以犹他州高加索人群为研究对象,采集各型AMD患者和对照组人群血样并提取DNA。2.以SNP rs11200638为中心选取染色体10q26上HTRA1基因内或HTRA1上游的9个标签SNP位点,通过单核苷酸引物延伸法对犹他州高加索人群中的各型AMD患者和种族、年龄相匹配的正常对照组人群进行基因分型,并用卡方检验检测其与AMD的关联性。3.从健康成年人血样中提取RNA,通过RT-PCR克隆HTRA1基因的编码区,在原核中进行HTRA1重组蛋白的表达和纯化,并用Western Blot检测HTRA1重组蛋白的抗原性。4.用兔抗人HTRA1多克隆抗体对AMD患者和正常人眼球冰冻切片进行免疫组化反应,检测HTRA1在人眼各层次中的表达。 结果:1.SNP rs11200638与晚期AMD的2种类型,GA和湿性AMD,具有几乎一致的显著关联性,其与软性玻璃膜疣也具有一定的关联性,但比晚期AMD低。SNP rs10490924与各型AMD具有显著的关联性,但不及rs11200638显著。2.以pET32a为载体构建的重组质粒,在BL21细菌中经IPTG诱导后,获得高效的HTRA1重组蛋白表达。通过Ni-NTA蛋白纯化柱纯化,获得高纯度并具有抗原性的重组HTRA1蛋白。3.HTRA1在玻璃膜疣和新生血管组织上均有表达。 结论:1.HTRA1启动因子内的rs11200638除了与湿性AMD有关联外与GA和软性玻璃膜疣均有显著的关联性。HTRA1很可能是晚期AMD,包括GA和湿性AMD的主要危险因子,对软性玻璃膜疣的形成亦有一定的影响。2.由于His.Tag与Ni-NTA蛋白纯化柱的特异性结合,我们获得了高纯度的HTRA1重组蛋白。通过Western Blot对纯化、透析后的重组蛋白抗原性进行检测,发现该蛋白具有很好的抗原性。因此,只需通过放大培养即可获得大量高纯度并具有天然抗原性的HTRA1重组蛋白,以用于动物模型的体内功能研究和抗体的制备。3.HTRA1可能在玻璃膜疣和新生血管的形成过程中起到了重要的作用,玻璃膜疣和新生血管形成可能并非是完全独立的2个阶段。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 李扬;苟文丽;;HtrA1生物学功能及与早发型重度子痫前期的相关性[J];现代妇产科进展;2010年11期
2 郭娜;宗璐;苟文丽;;HtrA1在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中的表达[J];中国妇幼健康研究;2008年02期
3 温宜萍;钟刚;;Htra1mRNA在PCOS大鼠卵巢颗粒细胞中的表达及意义[J];中国优生与遗传杂志;2010年07期
4 赵莉娜;宗璐;苟文丽;;HtrA1与妊娠期高血压疾病[J];中国妇幼健康研究;2008年02期
5 宗璐;苟文丽;郭娜;;HtrA1和TGF-β1在妊娠期高血压病患者胎盘中的表达[J];西安交通大学学报(医学版);2011年03期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 张旗;李贤玉;周密;李冉;;HtrA1在小鼠牙齿发育过程中的表达[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年
2 李冉;李贤玉;周密;韩娜娜;张旗;;HtrA1可能通过BMP-2来调节人牙周膜细胞成骨分化[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年
3 李扬;李春芳;宗璐;苟文丽;;HtrA1与早发型重度子痫前期相关性研究[A];中华医学会第三次全国妊娠期高血压疾病学术研讨会论文汇编[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 楚洁;中国人渗出性年龄相关性黄斑变性易感基因及与环境交互作用研究[D];中国协和医科大学;2007年
2 王晓玲;CARASIL家系HTRA1突变基因与血管平滑肌细胞TGF-β信号通路的关系研究[D];第二军医大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前5条
1 曾杰西;HTRA1启动子区域的多态性与年龄相关性黄斑变性的关联性[D];中南大学;2007年
2 付丽丽;HtrA1基因在卵巢癌细胞中的表达及其对卵巢癌侵袭迁移的影响[D];重庆医科大学;2012年
3 金雷;HtrA1丝氨酸蛋白酶表达对肝癌细胞凋亡和多药耐药的影响[D];苏州大学;2009年
4 徐伟;年龄相关性黄斑变性的流行病学研究[D];华中科技大学;2009年
5 徐伟;年龄相关性黄斑变性的流行病学研究[D];华中科技大学;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978