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重组IFN-β大肠杆菌诱导表达系统的建立

刘灿华  
【摘要】: 目的:构建大肠杆菌表达系统,以获得INF-β在大肠杆菌中的表达。 方法:采用PCR扩增IFN-β基因片段,并通过EcoRI和BamHI酶切后用T_4DNA连接酶连接到PGEX4T-1质粒中,构建重组质粒。将重组质粒转化入大肠杆菌DH5a,提取质粒经双酶切鉴定正确后,再转化入表达宿主大肠杆菌BL21菌株。通过IPTG诱导IFN-β大量表达,表达蛋白经过SDS—PAGE检测。 结果:IFN-β基因的PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳分析可见存在500bp左右的区带,证明IFN-β基因的PCR结果成功:pGEX4T-1空质粒经酶切后大小由4.3Kb减小为4Kb的大片断;重组质粒转染大肠杆菌,经培养后提取的质粒经酶切后发现有2个片断,一个4Kb,另一个500bp左右;提取的质粒经PCR以后也检出500bp左右的区带。以上三个检测结果证明重组成功。培养转染重组质粒的E.coli BL21,通过SDS-PAGE检测出菌体粉碎提取液中存在一个46KD的蛋白质,而阴性菌体没有这个蛋白质,证明表达成功。 结论:重组成功IFN-β基因片段,然后通过E.coli BL21可以表达IFN-β融合蛋白。本实验成功构建了重组大肠杆菌表达IFN-β的基础体系以及相关检测方法。


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