脑脊液对神经干细胞增殖分化影响的实验研究

【摘要】： 第一章新生大鼠脑和脊髓神经干细胞的分离培养和鉴定 目的：研究新生鼠脊髓源性神经干细胞(neural stem cells,NSCs)和脑源性神经干细胞在形态学及增殖能力等方面的异同，为神经干细胞的移植应用打下基础。 方法：从新生24小时的SD大鼠脊髓和脑组织中分离培养神经干细胞，用无血清培养技术在体外进行培养、扩增、传代，去除生长因子后在含血清培养基中诱导分化，在相差显微镜下动态观察两种不同来源的神经干细胞的生长情况及增殖分化方面的异同，通过免疫荧光技术鉴定神经干细胞及其分化细胞。 结果：脊髓源性和脑源性神经干细胞具有相似的形态结构，均可自我更新和增殖。但脑来源的神经球数量和每个神经球所含细胞数均多于脊髓，脑源性神经干细胞增殖速度明显更快，两种来源的大部分原代和传代神经球均表达神经干细胞特异性抗原Nestin阳性，可分化为三种神经细胞，表达神经元、星形胶质细胞的特异性抗原NSE、GFAP，反复传代后这些细胞可保持自我增殖能力及多向分化潜能。 结论：1．从新生鼠的脊髓和脑组织中均可分离培养出神经干细胞，都具有自我更新和增殖能力，并具有多向分化潜能。 2．相同培养条件下，脑源性神经干细胞的数量多，增殖能力强于脊髓源神经干细胞，二者在体外都能大量扩增。 第二章脑脊液对神经干细胞增殖分化的影响 目的：研究脑外伤血性脑脊液和脑积水清亮脑脊液对神经干细胞增殖分化的影响。 方法：从新生24小时的SD大鼠脑组织中分离培养神经干细胞，经传代后，分别用人的脑外伤血性脑脊液和脑积水清亮脑脊液培养神经干细胞，模拟不同时期神经干细胞经脑脊液移植后在脑脊液中的生长情况，并分为试验组(血性脑脊液组)和对照组(脑积水清亮脑脊液组)，分别于不同时间观察神经干细胞在两组脑脊液中的生长及增殖分化情况，并应用免疫细胞化学技术对两组脑脊液中神经干细胞的分化进行鉴定和比较。 结果：神经干细胞在两种脑脊液中均能存活，部分细胞呈悬浮生长，大部分细胞贴壁分化。同对照组相比，血性脑脊液组中神经球贴壁分化的比例高，速度快，分化更彻底。免疫细胞化学检测显示，两组脑脊液中分化的细胞均表达神经元、星形胶质细胞的特异性抗原NSE、GFAP。分化第2天试验组NSE阳性细胞的比例比对照组高，有统计学意义(P＜0.05)；分化第10天试验组GFAP阳性细胞的比例比对照组高，NSE阳性细胞的比例比对照组低，有统计学意义(P＜0.05)。 结论：1．神经干细胞能在脑外伤血性脑脊液和脑积水清亮脑脊液中均能存活、增殖和分化。 2．神经干细胞在脑外伤血性脑脊液中贴壁分化的速度比在脑积水清亮脑脊液中要快，贴壁分化比例要高。 3．脑外伤血性脑脊液和脑积水清亮脑脊液对神经干细胞分化的种类上有差异。神经干细胞在脑外伤血性脑脊液中倾向于向胶质细胞方向分化，在脑积水清亮脑脊液中倾向于向神经元方向分化。