收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

人类正常精浆蛋白液化过程的二维电泳研究

汤乐  
【摘要】: 研究目的: 在本所建立和优化人类精浆蛋白提取方法,建立较窄pH梯度(pH4-7)二维电泳图谱和液化各个时间点宽pH梯度(pH3-10)二维电泳图谱。利用差异蛋白质组学的方法分析精浆蛋白在液化过程中各种蛋白的变化规律,初步探讨其在精液液化和男性生殖中的作用。 材料: 随机选取13名身体健康并排除遗传病史,年龄在20—30岁之间,且精液确定已使AID病人受孕并分娩了正常的婴儿的供精者,所有供精者都签署了供精知情同意书。所有供精者在标本采集前后微生物感染检查均为阴性。 收集正常男性精浆标本,取不液化、液化10min、30min、60min以及镜下精液液化时等几个时间点的精浆蛋白。 方法: 1.比较TCA/丙酮沉淀蛋白抽提法和超滤/变性蛋白抽提法提取蛋白的优劣,选取和优化提取效率较高的蛋白抽提法提取蛋白。 2.二维电泳技术分离蛋白点并利用差异蛋白质组学方法比较不同液化时间的精浆蛋白进行差异分析。 3.比较临床检测镜下水平液化时的精浆蛋白二维电泳图谱与各时段精浆蛋白二维电泳图谱。 4.MALDI-TOF质谱鉴定所获得的发生变化的蛋白点进行生物信息学分析。 结果: 1.比较了两种二维电泳蛋白提取方法,结果显示TCA/丙酮沉淀蛋白抽提法提取获得人类精浆蛋白效率高于超滤/变性抽提法。 2.使用较窄范围pH胶条(pH4-7)固象梯度胶条建立了在pH4-7段的正常人类精浆蛋白图谱,获得了718个蛋白点;使用宽范围pH胶条(pH3-10)建立不同液化时间正常人类精浆蛋白二维电泳图整合后共获得739个蛋白点。 3.利用差异蛋白质组学方法,使用ImageMaster5.0~(TM)分析软件对不同液化时间精浆蛋白二维电泳图谱进行差异分析获得了36个差异蛋白点;对比了镜下液化的精浆蛋白,与液化30分钟后的精浆蛋白在蛋白水平上无显著差异。 4.质谱鉴定了其中23个蛋白点,获得了18种在精浆液化过程中变化的蛋白片段,其中14个蛋白片段在液化过程中降解,4个蛋白片段含量增加。 结论: 本试验在建立了正常可生育男性精浆蛋白图谱的基础上,对在液化不同时间的精浆蛋白进行二维电泳分析,对人类精浆蛋白进行动态地研究,质谱鉴定获得了18个在精浆液化过程中变化的蛋白片段,其中14个蛋白片段在液化过程中降解,4个蛋白片段含量增加。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 戎奇吉;陈俊杰;余权力;赵锎;;浙江慈溪地区胃癌患者血清蛋白质分析[J];中国卫生检验杂志;2009年06期
2 程志强;王扬;何旺;李鸣;;应用二维电泳、液相色谱串联质谱技术筛选前列腺癌骨转移相关血清蛋白[J];肿瘤防治研究;2009年05期
3 黄敏慧;吴雅臻;洪敏;;蛋白质组学在脑脊液中的研究新进展[J];吉林医学;2008年05期
4 秦志;苏伟;;蛋白质组学及其在骨科疾病中的基础研究[J];广西医学;2010年05期
5 李颖;邢怡桥;喻红;陈长征;侯炜;杜磊;李猛;魏礼清;;视网膜色素上皮细胞蛋白质组学研究中二维电泳条件的优化[J];武汉大学学报(医学版);2007年03期
6 徐子剑;舒骁;杨亦玮;刘进元;;棉花纤维蛋白质3种提取及二维电泳方法的比较[J];中国生物化学与分子生物学报;2006年01期
7 陈军;植懿丹;;二维电泳技术的实验教学体会[J];检验医学与临床;2009年09期
8 张力;王瑞白;闫梅英;肖迪;阚飙;;伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌分离株的外膜蛋白谱比较[J];生物技术通讯;2011年02期
9 崔丽艳,张捷,王天成;同型半胱氨酸刺激大鼠动脉平滑肌细胞增生功能蛋白质组的初步研究[J];医学研究生学报;2004年04期
10 姚远;杜劭君;刘进元;;利用碱性磷酸酶初步判定二维电泳中蛋白质磷酸化修饰[J];中国生物化学与分子生物学报;2007年08期
11 潘三强;宿宝贵;吕来清;;小鼠胼胝体的蛋白组学研究(英文)[J];神经解剖学杂志;2010年03期
12 刘曦明;许建中;;质谱技术的研究进展及在骨科的应用[J];华南国防医学杂志;2007年04期
13 龙耀庭;质谱技术在致癌、致畸与致突研究中的应用[J];癌变.畸变.突变;1993年06期
14 毛友生,张自森,赵晓航;SELDI-TOF质谱技术与肿瘤体液标志物研究[J];癌症进展;2004年03期
15 任绪义;周敏兰;张欣宗;刘洋;虞闰六;;特发性男性不育患者精浆蛋白质分析[J];基础医学与临床;2009年07期
16 洪新雨;李柏;李文臣;李毅平;罗毅男;;室管膜瘤患者脑脊液蛋白质组学分析[J];中国实验诊断学;2010年03期
17 康琳;李楠;高宏伟;王景林;;质谱技术在微生物检测和鉴定中的应用[J];中国卫生检验杂志;2010年10期
18 朱昌亮,叶炳辉,朱晓龙,赵学忠,李波,陶亮风,何秀华,赵慰先;我国五地钉螺二维电泳多肽图谱的比较研究[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;1988年S1期
19 柳夏林,郭莉,黄强,吴明星,吴开力;二维电泳联合质谱技术鉴定水溶性晶状体蛋白[J];眼科研究;2003年02期
20 刘亚伟;戴兵;梅长林;;质谱技术分析磷酸化蛋白的研究进展[J];医学分子生物学杂志;2006年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 范立青;汤乐;朱文兵;;正常人类精子蛋白二维电泳图谱免疫学鉴定方法的建立[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年
2 刘学博;方金炉;许胜国;吴炜琦;王金华;邱淑范;李潭秋;陈剑;;质谱技术在潜艇大气成份监测中的应用[A];第一届全国人—机—环境系统工程学术会议论文集[C];1993年
3 程志强;王扬;何旺;李鸣;;应用二维电泳、液相色谱串联质谱技术筛选前列腺癌骨转移相关血清蛋白[A];第十六届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2009年
4 卢瑗瑗;王新;刘震雄;陈峥;靳斌;翟惠虹;张发明;郭学刚;樊代明;;结肠癌特异性新抗原MC3-Ag的分离与鉴定[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
5 王新;卢瑗瑗;杨静华;时永全;兰梅;翟惠虹;樊代明;;胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR与亲本细胞SGC7901的比较蛋白质组学研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
6 陈伟;马对;宋宇飞;;利用离子迁移质谱技术研究金属氧簇合物分子的自组装和构型转变行为[A];中国化学会第28届学术年会第8分会场摘要集[C];2012年
7 孙东明;程平;;三唑类杀菌剂的质谱试验分析[A];中国化学会第27届学术年会第06分会场摘要集[C];2010年
8 齐飞;潘洋;张泰昌;洪新;张允武;;同步辐射真空紫外光电离质谱技术在有机分析中的应用[A];中国有机质谱学第十四届全国学术大会会议论文集[C];2007年
9 顾学范;;串联质谱技术在遗传性代谢病临床诊断和新生儿筛查中的应用[A];中华医学会第五次全国围产医学学术会议论文汇编[C];2005年
10 朱叶飞;马翔;冒韵东;王蕾;刘劝;谢满鑫;赵欣;孟艳;周作民;沙家豪;;小鼠睾丸二维电泳参照图[A];21世纪男科学——中华医学会第五次全国男科学学术会议论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 应万涛;基于凝胶电泳的蛋白质组研究策略及应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
2 陈斌;紫外线辐射对皮肤细胞作用的蛋白质组学研究[D];南京医科大学;2006年
3 王昕;金属元素标记结合质谱技术的蛋白质组多重定量新方法研究及应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2012年
4 汪晓军;蛋白质组学技术筛选新生隐球菌侵袭血管内皮细胞相关蛋白质及其表达研究[D];第二军医大学;2007年
5 鲁爽;精子发生过程中组蛋白H2A.H2B编码及功能研究[D];中国协和医科大学;2009年
6 杨阳;新生隐球菌与小胶质细胞相互作用中差异表达蛋白质的研究[D];第二军医大学;2005年
7 袁强华;双频容性耦合等离子体特性的实验研究[D];苏州大学;2009年
8 肖汀;一种研究血液中肺癌相关游离蛋白的新策略[D];中国协和医科大学;2005年
9 杨轶轩;胃癌细胞多药耐药机制的蛋白质组学研究[D];中南大学;2006年
10 钱林溪;乙醇对斑马鱼早期胚胎发育的影响及其分子机制研究[D];复旦大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 汤乐;人类正常精浆蛋白液化过程的二维电泳研究[D];中南大学;2007年
2 鄢飞燕;新型常压质谱技术及其在生物样品分析中的应用[D];东华理工大学;2012年
3 向桢;采用DIGE方法对人类不育和高生育能力精子的差异蛋白质组学研究[D];中南大学;2009年
4 孙珍;生物质谱技术和方法在蛋白类药物序列鉴定中的应用研究[D];复旦大学;2011年
5 张春玲;胃癌血清标志物筛选的初步研究[D];大连医科大学;2008年
6 张振峰;小鼠肝脏耐热蛋白的初步研究[D];华东师范大学;2004年
7 顾超慧;羊种布鲁氏菌强毒株16M与疫苗株M5差异蛋白质组学分析[D];内蒙古农业大学;2009年
8 殷建文;低温胁迫条件下拟南芥全细胞蛋白质的双向电泳分析[D];吉林大学;2005年
9 黄琳玲;蛋白质组学研究脉冲电场诱导对中国红豆杉细胞蛋白表达的影响[D];华东师范大学;2005年
10 徐守军;EB病毒与Okadaic Acid分别及协同处理HNE—1细胞的蛋白表达谱[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 实习生相海珠;质谱技术,开启生命科学崭新时代[N];浙江日报;2002年
2 本报记者 杨蕾;为了中国质谱业的明天[N];中国质量报;2011年
3 柏林 于洋 兆军;长春应化所中药研究成果丰[N];科技日报;2007年
4 钟心;瑞士SMartNose公司到新烟集团进行技术交流[N];经理日报;2007年
5 任铭;“质谱联用仪器的研制与开发”课题通过验收[N];中国国门时报;2007年
6 记者 李陈续 通讯员 杨保国;中法合作探寻自燃之谜[N];光明日报;2010年
7 姜小毛杨章跃;陈焕文获瑞士分析化学杰出贡献奖[N];中国化工报;2008年
8 记者 吴长锋;关于过氧化物的二十年猜想终获证实[N];科技日报;2010年
9 ;用飞行质谱技术筛选结直肠癌患者中特异性生物标志物的临床意义[N];中国医药报;2003年
10 本报记者 海霞;创新精神催生创新技术[N];中国经济导报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978