收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

去细胞结合光氧化制备牛颈静脉带瓣管道的组织学研究

吕卫东  
【摘要】: 第一章去细胞结合光氧化处理牛颈静脉带瓣管道的制备和体外组织学评价 目的:采用去细胞结合光氧化方法制备牛颈静脉带瓣管道,并通过观察去细胞结合光氧化方法制备的牛颈静脉管道的体外组织学改变,评估其作为一种组织工程支架材料的可行性。 方法:将24根新鲜牛颈静脉带瓣管道分成Ⅰ-Ⅵ共6组(n=4),通过调整曲那通X-100和核酸酶的浓度,采用曲那通X-100、EDTA/胰蛋白酶和核酸酶三步法对牛颈静脉管道进行去细胞处理,用苏木素-伊红染色和α-SMA免疫组化染色方法评价管壁细胞核与平滑肌成分的去除程度,找出最佳去细胞方案,并检测其处理前后管壁DNA含量变化。然后用亚甲基蓝介导的光氧化方法对管道进行交联。对去细胞结合光氧化处理后的牛颈静脉管壁和瓣膜的细胞外基质成分(包括胶原、弹力纤维、氨基聚糖、硫酸软骨素,层粘连蛋白和纤粘连蛋白)进行组织化学和免疫组织化学染色和分析,并作扫描电镜和透射电镜分析,相应新鲜组织、单纯光氧化组织和单纯去细胞组织作为对照。4组管壁的胶原、弹力蛋白和氨基聚糖成分进行定量分析(n=8)。对4组的氨基酸成分进行测定比较。 结果:第Ⅵ组牛颈静脉管壁的细胞核去除较彻底,平滑肌碎片也基本消失,并且组织结构无明显破坏,其它组去细胞处理后或多或少有细胞核与平滑肌成分残留。第Ⅵ组方法处理的管壁的DNA去除率达到95.7%。与新鲜组织比较,光氧化处理后组织表面结构变的致密,氨基聚糖减少;去细胞处理后细胞及其成分去除彻底,胶原保留较好,弹力纤维、氨基聚糖(包括硫酸软骨素)、纤粘连蛋白和层粘连蛋白有所减少;去细胞后进一步光氧化交联,其表面结构变得致密。与新鲜组织比较,光氧化组管壁的胶原与弹力蛋白含量基本不变(p均>0.05),氨基聚糖相对含量减少(P<0.05);去细胞组胶原相对含量增加(P<0.05),而弹力蛋白和氨基聚糖相对含量减少(P均<0.05)。去细胞结合光氧化处理组与去细胞组相似。氨基酸分析表明光氧化和去细胞处理都对氨基酸成分有影响。 结论:去细胞结合光氧化方法制备的牛颈静脉可以初步作为一个组织工程支架材料。 第二章去细胞结合光氧化制备牛颈静脉带瓣管道重建犬右心室—肺动脉连接后组织学的变化及其机制研究 目的:研究去细胞结合光氧化方法制备的牛颈静脉带瓣管道用于重建犬右心室—肺动脉连接后,在体内循环系统中与血液接触的条件下的表面内皮化、细胞浸润和组织成分降解与再生的动态变化以及钙化情况,了解其变化的可能机制,探讨这种新型牛颈静脉带瓣管道的临床应用可行性与前景。 方法:本研究以经去细胞结合光氧化方法制备的牛颈静脉带瓣管道为研究对象,建立犬重建右心室—肺动脉连接的动物模型。实验动物分别于1月、6月和1年屠宰后取出标本,大体观察了解其形态改变;组织化学和免疫组织化学染色观察各种炎性细胞浸润、表面内皮细胞生长、细胞外基质主要成分的降解和再生情况,von kossa钙盐染色观察组织钙化情况。电镜检查了解植入后的管壁超微结构变化。对不同时间取出牛颈静脉管壁的胶原、弹力蛋白和氨基聚糖成分进定量分析(n=3,3,6),并对胶原的中性盐溶性片段、醋酸溶性片段和胃蛋白酶溶性片段进行提取和含量测定,植入前组织作为对照(n=8)。对不同时间取出管壁的氨基酸成分进行分析比较。 结果:16只犬除了4只死于手术中室颤外,余12只得以存活。1月和6月各宰杀3只,1年时宰杀6只进行检测。解剖时未发现有血栓和钙化形成;除了1年犬有一只近端吻合口处有膜状增生外,其余犬的两端吻合口无明显增生和狭窄;各个管道的瓣膜无明显增厚,活动良好。组织学检查结果显示随着植入时间的延长,管道内膜面的内皮化程度和管壁的血管化程度不断提高。1月植入管壁外层见少量巨噬细胞和较多成纤维细胞和成肌纤维细胞浸润;6月和1年时巨噬细胞消失,而成纤维细胞和成肌纤维细胞的密度增加,并且逐渐向中层和内层方向迁移。随植入时间延长,管壁新生胶原和氨基聚糖逐渐增多,新生组织的部位也逐渐向内层方向发展;弹力纤维随植入时间延长降解比较显著,仅观察到少量的弹力纤维再生。瓣膜组织也观察到细胞浸润与组织再生。1年时管壁和瓣膜的von kossa钙盐染色基本未见到明显钙化点,仅远端吻合口进针部位有少量钙化。犬体内植入后组织含量测定胶原相对含量在1月时明显减少,6月基本维持,而1年时又增加;弹力蛋白相对含量1月时略增加,6月与1年时变化不大;氨基聚糖相对含量随时间延长逐渐增加。胶原中性盐溶性片段和醋酸溶性片段随植入时间延长含量逐渐增加;胃蛋白酶溶性片段1月时下降明显,6月时和1月时基本相当,1年时比6月时含量增加,与植入前相当。氨基酸分析随着植入时间延长,经去细胞结合光氧化处理降低的氨基酸,其含量逐渐回升。 结论: 1去细胞结合光氧化方法制备的牛颈静脉带瓣管道体内植入后随着时间的延长,基本实现了细胞外基质主要成分的再生与更替,初步实现了一种具有再生特征的生物管道; 2去细胞结合光氧化方法制备的牛颈静脉带瓣管道炎症反应轻,抗钙化性能好,支持内皮细胞生长,具再生功能,可以初步作为一种较为理想的肺动脉替代材料。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李伟;杨丽娟;吴忠仕;张庆广;刘哲亮;胡建国;刘文亮;;去细胞光氧化处理牛颈静脉带瓣管道的形态学研究[J];中南大学学报(医学版);2008年06期
2 王圣;李温斌;;去细胞组织工程心脏瓣膜研究现状与展望[J];中国医疗器械信息;2009年02期
3 崔彬,刘迎龙,谢宁,于存涛,宋来凤,李建荣,吴松;去细胞组织工程同种心脏瓣膜的构建[J];中华医学杂志;2004年16期
4 史嘉玮;董念国;孙宗全;仇玉明;;RGD肽联合转化生长因子-β_1对组织工程瓣膜构建的影响[J];中华医学杂志;2006年29期
5 刘强,柴家科,杨红明,尹会男;选择性去细胞异种(猪)皮与自体微粒皮复合移植对创面愈合的影响[J];中国临床康复;2004年11期
6 顾春虎,刘维永,易定华,王云雅,张近宝,卫向阳,欧阳辉,刘星光,谭红梅;改良去细胞方法对猪源性逆转录病毒的影响[J];中华医学杂志;2005年26期
7 孙明学;唐金树;王鑫;赵斌;眭翔;许文静;卢世璧;;去细胞处理对化学去细胞异体神经免疫原性的影响[J];中华外科杂志;2006年04期
8 韩啸;蒋雄刚;徐鹏;张凯伦;杨华静;;聚乙二醇和胰蛋白酶用于猪动脉管道去细胞效果比较[J];华中科技大学学报(医学版);2007年04期
9 胡孝辉;杨鹏高;高丰厚;方勇;;去细胞羊膜负载毛囊干细胞修复裸鼠全层皮肤缺损[J];上海交通大学学报(医学版);2010年12期
10 刘洋;刘珊珊;段维勋;朱海龙;俞世强;金振晓;刘维永;易定华;;染料介导光氧化处理去细胞牛颈静脉带瓣管道的生物学特性[J];中国胸心血管外科临床杂志;2011年03期
11 李悟;周仲毅;王忠华;张民;刘维永;金峰;;去细胞牛颈静脉构建组织工程右心带瓣管道生物相容性实验[J];现代生物医学进展;2008年01期
12 崔彬,刘迎龙,谢宁,于存涛,宋来凤;去细胞组织工程同种心脏瓣膜的生物学特征[J];中华胸心血管外科杂志;2004年03期
13 刘洋;刘维永;顾春虎;李悟;张近宝;谭红梅;;猪主动脉瓣膜去细胞基质体外酶解分析[J];心脏杂志;2006年02期
14 顾春虎;王云雅;周华松;邬晓成;刘洋;刘维永;赵金超;易定华;;环氧氯丙烷对猪主动脉瓣膜去细胞基质体外酶解影响[J];临床心血管病杂志;2007年10期
15 刘洋;孙国成;刘珊珊;谭红梅;欧阳辉;易定华;刘维永;;染料介导光氧化处理去细胞猪主动脉瓣的生物学特性[J];中国胸心血管外科临床杂志;2008年03期
16 唐金树;袁玫;赵庆;孙明学;赵斌;许文静;崔雪梅;卢世璧;;化学去细胞神经同种异系(体)移植的免疫学反应[J];军医进修学院学报;2006年06期
17 蒋红亮;武秀华;黄利荣;;去细胞组织工程心脏瓣膜构建的实验研究[J];交通医学;2007年06期
18 刘洋;刘珊珊;朱海龙;段维勋;孙国成;易定华;刘维永;;染料介导光氧化处理去细胞牛颈静脉带瓣管道的细胞毒性研究[J];国际心血管病杂志;2011年03期
19 ;改良去细胞方法对猪源性逆转录病毒的影响[J];第四军医大学学报;2005年21期
20 龙小毛;林辉;李香伟;;异种牛颈静脉带瓣管道重建右室流出道的实验研究[J];广西医学;2009年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘玲英;柴家科;杨红明;孙天骏;韩焱福;苏鹏;冯瑞;;选择性去细胞异种皮的制备与性能检测[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
2 柴家科;杨红明;李利根;郭振荣;盛志勇;许明火;陈宝驹;贾晓明;京萨;陆江阳;李国红;;去细胞异体真皮、去细胞猪真皮和自体刃厚皮移植在临床中的应用[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年
3 苗三林;斐洪芳;;去细胞异体真皮在烧伤中的应用[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年
4 刘强;孟爱华;贺立新;杨红明;柴家科;;异种(猪)去细胞真皮基质在体内转归的动物实验与临床观察[A];第四届全国烧伤救治专题研讨会烧伤感染救治新进展论文汇编[C];2006年
5 周华松;顾春虎;陈文生;赵金超;王云雅;谭红梅;易定华;;去细胞猪主动脉瓣的制备[A];中华医学会第七次全国胸心血管外科学术会议暨2007中华医学会胸心血管外科青年医师论坛论文集心血管外科分册[C];2007年
6 柴家科;杨红明;盛志勇;;选择性去细胞猪皮研制及初步临床应用[A];全国烧伤早期处理专题研讨会论文集[C];2002年
7 郭义柱;王岩;梁雨田;卢世璧;刘相成;陶笙;唐金树;孙明学;;化学去细胞神经同种异体移植的临床应用[A];第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛论文汇编[C];2009年
8 包骥;石毓君;孙怀强;杨瑞娜;步宏;;利用去细胞化天然肝脏支架构建新型门静脉植入型组织工程肝脏的实验研究[A];中华医学会病理学分会2010年学术年会日程及论文汇编[C];2010年
9 王建云;刘小林;向剑平;朱家恺;邓宇斌;李佛保;;类雪旺细胞种植入去细胞神经桥接物后体内外标记示踪及神经功能恢复检测[A];2005'中国修复重建外科论坛论文汇编[C];2005年
10 朱国臣;吴四海;张永胜;袁渊;吕春江;赵新;朱侃;肖大江;;兔化学去细胞神经桥接大鼠面神经缺损[A];中华医学会第十次全国耳鼻咽喉-头颈外科学术会议论文汇编(上)[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘巍;构建去细胞牛颈静脉内皮化实验研究[D];中南大学;2009年
2 吕卫东;去细胞结合光氧化制备牛颈静脉带瓣管道的组织学研究[D];中南大学;2007年
3 薛辉;羊膜上皮细胞与化学去细胞肌肉支架联合移植治疗大鼠脊髓损伤的研究[D];吉林大学;2010年
4 张明;去细胞结合光氧化制备的牛颈静脉带瓣管道的性能研究[D];中南大学;2007年
5 李小冰;去细胞牛颈静脉经RGD修饰促进内皮生长的实验研究[D];中南大学;2007年
6 高峰;人造纤维织物外支架—牛颈静脉带瓣管道复合体的制备研究[D];中南大学;2009年
7 史峰;复合材料体外动态构建组织工程心脏瓣膜及其钙化机制研究[D];华中科技大学;2012年
8 邹明晖;枝化状PEG交联去细胞瓣复合材料研制及力学性能研究[D];华中科技大学;2011年
9 乔刚;去细胞光氧化交联处理的牛颈静脉RGD光化学法表面修饰及再内皮化的研究[D];中南大学;2007年
10 周建良;PEG交联去细胞瓣多信号复合材料生物学性能研究[D];华中科技大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李国栋;丹宁酸交联处理对脱细胞牛颈静脉生物稳定性影响的初步研究[D];山西医科大学;2008年
2 李伟;去细胞结合光氧化技术处理牛颈静脉带瓣管道抗钙化性能研究[D];中南大学;2007年
3 欧阳文斌;去细胞结合多聚环氧化合物处理牛颈静脉的实验研究[D];中南大学;2009年
4 程远;去细胞化肝脏支架组织相容性及体外细胞共培养的实验研究[D];南方医科大学;2011年
5 蒋立仲;去细胞心脏支架的制备和鉴定[D];华中科技大学;2010年
6 马瑞娜;去细胞全喉软骨支架的免疫学研究[D];第四军医大学;2010年
7 石力伟;新型肺动脉替代材料—去细胞光氧化牛颈静脉临床应用早中期结果报告[D];中南大学;2011年
8 林曦;新型抗钙化牛颈静脉带瓣管道的实验研究[D];广州中医药大学;2011年
9 董教明;辛基吡喃葡萄糖苷作为新型环保的去细胞试剂制备组织工程支架的研究[D];东华大学;2013年
10 许莉;犬去细胞喉支架的生物力学研究[D];第四军医大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 白言;化学去细胞同种异体神经移植的临床前期研究[N];科技日报;2003年
2 张献怀;我国去细胞异体神经移植获佳绩[N];中国医药报;2004年
3 王雪飞通讯员 王继荣 刘泉;“自己人找自己人”让移植神经修复受伤神经[N];健康报;2008年
4 林 子;揭开癌症的秘密[N];中国商报;2003年
5 张献怀;著名烧伤专家柴家科荣立一等功[N];科技日报;2005年
6 王蔚佳;高科技 为残疾人找回健康生活[N];中国消费者报;2003年
7 通讯员 张献怀;神经断了可以移植修复[N];中国消费者报;2004年
8 向刚尔 张献怀;烧伤领域的“火凤凰”[N];光明日报;2007年
9 向刚尔 张献怀 毛会彬;柴家科 烧伤领域的“火凤凰”[N];健康报;2007年
10 本报特约记者  张献怀;病人的生命高于一切[N];大众科技报;2007年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978