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COPD大鼠模型骨骼肌萎缩中Caspase-3、-8、-9蛋白酶表达的研究

周妍  
【摘要】: 目的:研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型骨骼肌萎缩中肌细胞凋亡的参与情况,并通过测定几种关键的Caspase蛋白酶的表达来推断可能的凋亡信号传导途径。 方法:通过被动吸烟和气道注射猪胰弹性蛋白酶(PPE)建立COPD大鼠模型。从体重基本正常的COPD阳性大鼠中随机选取18只为COPD营养正常组(B组),从体重明显较轻的COPD阳性大鼠中随机选取18只COPD营养不良组(C组),另外选18只正常大鼠做为对照组进行研究。取三组大鼠的趾长伸肌和膈肌分别做成病理标本,用TdT介导的缺口末端标记(TUNEL)法和免疫组化法分别测定DNA碎片和评价Caspase-3、-8、-9在这些标本中的活性表达。 结果:用TUNEL法和Caspase-3免疫组化法测得的COPD营养不良组大鼠模型骨骼肌细胞的凋亡率分别是53.9%和44.4%,两种检测方法有较好的一致性(r=0.923);趾长伸肌重量是骨骼肌萎缩的一个稳定的指标,其与凋亡率呈明显的负相关(r=-0.89);Caspase-8、-9仅在COPD营养不良组大鼠肌细胞中明显表达,在趾长伸肌中的Caspase-8的平均光密度(AOD)和积分光密度(IOD)明显高于膈肌(0.58±0.07 vs 0.35±0.06,980.2±79.3 vs 313.2±25.9,P<0.01);但是在趾长伸肌中的Caspase-9的AOD和IOD值明显低于膈肌(0.39±0.05vs 0.48±0.08,430.2±42.5 vs 1010.2±106.3,P<0.01)。 结论:COPD大鼠模型营养不良组中骨骼肌萎缩和细胞凋亡存在联系;Caspase-3免疫组化法和TUNEL法测定的阳性肌细胞核数量基本相同,暗示着COPD骨骼肌萎缩的凋亡途径可能是Caspase依赖型的;Caspase-8的表达提示COPD大鼠模型骨骼肌细胞的凋亡可能是由外部受体介导的;本实验示Caspase-8、-9的表达在膈肌和趾长伸肌中有显著差别,提示在膈肌中线粒体更多的参与了凋亡。


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