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缺血后处理对同种异体大鼠胰腺移植缺血再灌注损伤保护作用及其机制研究

江浪清  
【摘要】: 缺血再灌注损伤是造成胰腺移植后各种并发症的主要原因之一,如移植术后早期胰腺炎、移植胰腺的原发无功能、移植术后胰岛细胞功能不良等,这些都大大降低胰腺移植的效果。研究发现,缺血预适应能有效地减小缺血再灌注时的器官损害,对器官起到保护作用,但在临床实际应用中,受很大的限制,而缺血后适应具有和预适应相似作用,且简便易行。缺血后适应是否在移植胰腺上也有保护作用,目前尚无文献报道。本研究旨在胰腺移植模型建立的基础上探讨缺血后处理对胰腺移植的缺血再灌注损伤是否具有保护作用,并确定最佳的缺血后处理模式,同时我们进一步探讨缺血后处理对移植胰腺缺血再灌注损伤的保护作用机制。 第一部分糖尿病大鼠胰腺移植模型的建立 目的:建立一种符合生理模式的糖尿病大鼠同种异体胰腺移植模型,为后续研究奠定基础。方法:50只SD大鼠一次性尾静脉注射链脲佐霉素65mg/kg诱导建立糖尿病大鼠模型。共成功建立36只糖尿病大鼠模型,作为移植受体,另36只SD大鼠作为供体。采用门静脉回流肠内引流术式行全胰十二指肠移植。术后观察大鼠的一般情况及血糖动态变化情况,并对移植胰腺进行大体观察和组织病理学检查。结果:共施行36次大鼠胰腺移植手术,成功30例,移植成功率为83.3%;大鼠移植术后一般情况良好,术后血糖均低于11.2 mmol/L,并在一周内呈下降趋势,胰腺组织病理学改变见腺叶结构完整,有少量炎性细胞浸润。结论:大鼠胰腺移植模型稳定、可靠,符合生理模式,可以用于进一步深入研究。 第二部分缺血后处理对同种异体大鼠胰腺移植缺血再灌注损伤保护作用及其机制研究 目的:探讨缺血后处理对移植胰腺缺血再灌注损伤是否具有保护作用、最佳后处理时间及其保护作用的可能机制。方法:16只正常大鼠为假手术组(sham,n=16),44只糖尿病大鼠为缺血再灌注组(Control n=16)、缺血后处理组(IPO组,n=28)并按照随机区组设计分组手术,其中IPO组又根据后处理时间不同(15秒,30秒,60秒)分为3个亚组:IPO1(n=6),IPO2(n=16)和IPO3(n=6)组,术后运用DTNB比色法检测胰腺组织中MPO、GSH-Px活性及GSH含量,硫代巴比妥酸法测定MDA含量,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,Tunnel染色法检测胰腺组织中凋亡细胞,RT-PCR(反转录-多聚酶链式反应)检测Bcl-2、Bax基因表达,western blot法和免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:缺血再灌注组及缺血后处理各组术后血糖均较术前明显降低(P<0.05),HE染色见缺血后处理各组移植胰腺病理损害程度显著轻于缺血再灌注组,其中缺血后处理中30秒灌注-30秒阻断组更为明显;与假手术组相比,移植胰腺组织GSH含量、SOD活力、GSH-Px活性降低(P<0.05),MDA含量、MPO活性明显增加(P<0.05),TUNEL染色阳性细胞数均明显增多,Bcl-2、Bax的表达均明显增加(P<0.05);与缺血再灌注组比较,缺血后处理组移植胰腺组织MDA含量和MPO活性明显减少,GSH含量、SOD活力、GSH-Px活性明显升高(P<0.05),TUNEL染色阳性细胞数明显减少,Bcl-2的表达增加,而Bax的表达降低(P<0.05)。 结论:1.缺血后处理对大鼠移植胰腺的缺血再灌注损伤具有保护作用。2.供体胰腺植入后完全再灌注前,给予30秒再灌注-30秒再阻断为一循环处理的3个循环处理对胰腺移植具有最佳的保护效果。3.缺血后处理的保护作用可能与抑制白细胞的粘附、渗出以及抗氧化作用有关。4.缺血后处理的保护作用可能通过上凋Bcl-2的表达,下调Bax的表达进而抑制胰腺细胞凋亡有关。


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