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HMGB1在子宫内膜癌及子宫肌瘤中的表达及其临床意义

吴佳捷  
【摘要】: 目的:探讨HMGB1(high mobility group box-1 protein)在子宫内膜癌组织及子宫肌瘤组织中的表达及其在子宫内膜癌及子宫肌瘤发生、发展中的作用,为子宫肌瘤和子宫内膜癌的预后和治疗提供理论依据。 方法:1、本研究从HMGB1原核表达质粒表达入手,纯化出具有生物学活性的HMGB1蛋白,检测我们纯化的HMGB1蛋白对于子宫内膜癌细胞株HECCL-1的增殖所起的作用。2、用常规半定量RT-PCR技术及实时荧光定量RT-PCR检测56例子宫内膜癌患者、60例子宫肌瘤患者、20例正常对照组以及18例子宫内膜不典型增生患者子宫内膜、肌层的HMGB1基因mRNA的表达情况,并比较不同临床病理、生理特征的子宫内膜癌组织及子宫肌瘤的HMGB1mRNA的表达差异。3、用Western-blotting技术、免疫组化sp法检测上述研究对象子宫内膜与肌层的HMGB1蛋白的表达情况,以及HMGB1蛋白分布情况。 结果: 1、利用专门用于表达有毒蛋白的E coli BL21(DE3)Plys菌株为宿主菌,诱导PGEX4T-1-HMGB1 GST表达质粒稳定表达了HMGB1融合蛋白,并纯化出有良好的免疫活性人重组HMGB1蛋白,重组HMGB1蛋白能够显著刺激子宫内膜癌细胞株HECCL-1细胞生长。 2、HMGB1 mRNA在子宫内膜癌组、子宫肌瘤内膜组、子宫内膜不典型增生组及正常子宫内膜组中的相对含量分别为0.35 12±0.0985、0.4155±0.1057、0.2754±0.0512和0.2208±0.0170,子宫内膜癌组高于内膜不典型增生组与正常子宫内膜组,差异有统计学意义(p<0.05);子宫肌瘤内膜组高于内膜不典型增生组与正常子宫内膜组,差异有统计学意义(p<0.05);子宫内膜不典型增生组高于正常子宫内膜组,差异有统计学意义(p<0.05)。HMGB1mRNA在子宫肌瘤中表达量明显高于肌瘤旁组织组(P<0.05)。 3、Western-blotting显示,HMGB1蛋白表达水平方面,子宫内膜癌组与肌瘤内膜组的HMGB1蛋白相对水平均比正常对照组高,且有显著差异(P<0.05)。然而,子宫内膜组与肌瘤组之间并无显著差异。未绝经组与绝经组之间有显著的不同,绝经组的HMGB1蛋白相对水平要低于未绝经组(P<0.05)。子宫肌瘤组、肌瘤旁组织组与正常对照组三者有差异,子宫肌瘤组、肌瘤旁组织组的HMGB1蛋白相对水平均比正常肌层对照组高,子宫肌瘤组高于肌瘤旁组织组,且有显著差异(P<0.05)。 4、免疫组化显示,HMGB1蛋白在子宫内膜细胞核及胞浆中均发现表达。内膜癌组阳性表达率比正常组高,且与正常组有明显差异。子宫内膜癌恶性程度与其胞浆HMGB1的阳性率正向相关。而子宫肌瘤HMGB1阳性反应主要定位在细胞核中,不同分组中细胞质仅有轻微的表达。 结论:HMGB1蛋白能够显著刺激子宫内膜癌细胞株HECCL-1细胞生长,HMGB1是促进子宫内膜癌生长的相关基因;HMGB1基因在子宫内膜癌组织、子宫肌瘤内膜与不典型增生子宫内膜、子宫肌瘤组织中高表达,表明其有促进细胞增殖的作用;胞核中HMGB1以促进细胞增殖为主,胞浆中的HMGB1与肿瘤生长、浸润、转移及细胞凋亡有更为密切的关系,子宫内膜癌患者内膜细胞胞浆中的HMGB1含量越高,肿瘤的恶性程度越高,其预后越差。HMGB1的分布对其功能产生重要影响。


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