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尼莫地平对H_2O_2诱导动脉血管平滑肌损伤的保护作用

蔡志春  
【摘要】: 目的:在离体猪脑基底动脉和人脐动脉平滑肌细胞水平上,观察尼莫地平对抗H_2O_2诱导氧化应激损伤和抗细胞凋亡的保护作用。为临床应用尼莫地平提供新的实验依据。 方法:(1)采用去内皮离体血管环灌流的方法,建立H_2O_2损伤模型。随机分为正常(未处理)组、H_2O_2(2×10~(-4)mol·L~(-1))损伤组、维生素C(10~(-4)mol·L~(-1))预处理组、尼莫地平高、中、低剂量(5×10~(-6)mol·L~(-1),5×10~(-7)mol·L~(-1),5×10~(-8)mol·L~(-1))预处理组血管,比较各组血管环对KCl、苯肾上腺素和H_2O_2收缩的影响;检测各组血管组织匀浆中的SOD(超氧化物歧化酶)、CAT(过氧化氢酶)、GSH-PX(谷胱甘肽过氧化物酶)活性及MDA(丙二醛)含量。(2)培养人脐动脉平滑肌细胞,观察尼莫地平(10~(-7)~10~(-10)mol·L~(-1))、维生素C(10~(-4)mol·L~(-1))对抗H_2O_2(10~(-4)mol·L~(-1))诱导细胞凋亡的情况。用MTT比色法检测细胞活力;流式细胞仪及Hoechst染色检测细胞凋亡情况;采用免疫组化染色方法检测血管平滑肌细胞Caspase-3的表达。 结果:(1)a.H_2O_2损伤组与正常组比较,血管环对KCl、苯肾上腺素和H_2O_2的收缩反应明显增加(P<0.05);维生素C不能缓解H_2O_2损伤后血管对KCl、苯肾上腺素的收缩反应增强现象,只能缓解对H_2O_2的收缩反应;尼莫地平高、中、低剂量呈剂量依赖性抑制KCl、苯肾上腺素和H_2O_2对血管环的收缩反应(P<0.01)。b.H_2O_2损伤组MDA含量升高,SOD、CAT、GSH-PX活性降低,与正常组比较,有显著性差异(P<0.05)。尼莫地平高、中、低剂量和维生素C均能降低组织中MDA含量,升高SOD、CAT、GSH-PX的活性,与H_2O_2损伤组比较,差异显著(P<0.05)。(2)H_2O_2损伤组使人脐动脉平滑肌细胞活力降低;细胞凋亡率有所增加,荧光染色显示典型的凋亡小体,表现为核固缩、碎裂;Caspase-3表达增加(P<0.05)。不同剂量尼莫地平均能显著提高平滑肌细胞活力(P<0.05),其中10~(-9)mol·L~(-1)浓度的尼莫地平组较其他浓度组更有统计学意义;该浓度也能减少细胞凋亡率,荧光染色显示凋亡小体减少,降低Caspase-3的表达(P<0.05),与维生素C组比较没有统计学意义(P>0.05)。 结论:钙通道阻断剂尼莫地平具有抗氧化应激作用,同时也可对抗H_2O_2诱导人脐动脉平滑肌细胞的凋亡,比维生素C更能预防H_2O_2对脑基底动脉血管的氧化损伤;其机制可能与降低Caspase-3表达有关。


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