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小鼠精子获能过程中酪氨酸磷酸化蛋白质的研究

樊国彪  
【摘要】: 蛋白质的酪氨酸磷酸化程度增强是精子获能后重要的标志之一,研究发现酪氨酸磷酸化蛋白通过多种信号通路参与精子获能,并且影响到精子获能后一些生理变化如:超激活运动、顶体反应等。 目的:本课题旨在分离小鼠精子获能中酪氨酸磷酸化增强的蛋白质,并对其进行质谱鉴定,为后续的功能研究奠定基础。 方法:小鼠精子体外培养获能后,用Western blot法确定酪氨酸磷酸化的蛋白质,然后用二维凝胶电泳技术分离蛋白质,ImageMaster软件分析后将目的蛋白挖点进行MALDI-TOF质谱分析。 结果:(1)小鼠精子获能后添加A23187诱导项体反应,发现顶体反应率明显升高,证明精子获能成功;(2)检测发现精子获能以后分子量为42,56、66,82和95 kDa的蛋白质酪氨酸磷酸化增强;(3)分别得到精子蛋白质银染和考马斯亮蓝染色的图谱,质谱分析后得到八个酪氨酸磷酸化蛋白质的肽质量指纹图。 结论:MALDI-TOF质谱鉴定八个酪氨酸磷酸化蛋白质。其中两个为未知蛋白,另外六个蛋白质中,乌头酸酶、甘油-3-磷酸脱氢酶、tektin 2是我们在精子获能过程中新发现的酪氨酸磷酸化蛋白质。


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